Cell Biolabs丨艾美捷壳聚糖检测试剂盒

Cell Biolabs丨艾美捷壳聚糖检测试剂盒

由β-（1）组成的多糖→4） -连接D-氨基葡萄糖和N-乙酰-DG-氨基葡萄糖。它是通过脱乙酰化，处理虾和其他动物的甲壳素壳而制成的甲壳类动物和氢氧化钠。壳聚糖已被研究用于许多有用的应用。它可以在农业上用作种子阻止植物中的真菌感染。壳聚糖可以用来防止葡萄酒变质。它是用作自修复聚氨酯涂料涂层。在医学上，壳聚糖可以减少出血在绷带中可以起到抗菌剂的作用。

此外，壳聚糖还被用于制备药物用于治疗焦虑症、偏头痛、青光眼、肺癌和糖尿病的输送系统。壳聚糖修饰的量子点已用于生物成像诊断癌症。衍生产品壳聚糖的抗氧化性能以及增强免疫反应已被证明对抗病原微生物。

Cell Biolabs 艾美捷 壳聚糖检测试剂盒为检测从食物、动物或植物样本中提取壳聚糖。首先，未知样品或标准品中的壳聚糖是通过分析试剂a转化为可检测的中间体。添加分析试剂B以形成a比色产品。将最终溶液转移到96孔板上，用平板测量分光光度计。未知样品中的壳聚糖含量通过与对照品进行比较来确定预定的标准曲线。所提供的试剂足以评估96个样品分析包括标准品和未知样品。试剂盒的灵敏度足以检测6.25µg/mL壳聚糖。

Cell Biolabs 艾美捷该试剂盒组成：

1.壳聚糖标准品（Part No. 51261B）：一个含有4 mg/mL壳聚糖的500µL小瓶。

2.分析试剂A（Part No. 51262B）：一个500µL小瓶。

3.分析试剂B(Part No. 51263A): 一个20毫升的瓶子。

4.10倍分析缓冲液（Part No. 51263A）：一瓶10毫升的10%醋酸

Cell Biolabs 艾美捷该样品的制备：

以下建议仅为从虾、龙虾或虾中提取壳聚糖的指南蟹壳，并可能会被修改，以优化或补充用户的实验设计。

•虾、龙虾或蟹壳：

1.用蒸馏水清洗0.5至5克壳废料，然后在真空中培养将锥形管放置在加热块上，或在80-100°C的烘箱中放置数小时，直到外观干燥。用研钵和杵将干燥的贝壳彻底研磨成粉末。

2.通过每克贝壳缓慢添加15毫升2 N HCl，并搅拌或去除粉末中的矿物质在室温下搅拌2小时。以20000 xg的速度将脱矿粉颗粒化10分钟分钟

3.用40毫升蒸馏水清洗。用pH纸监测上清液的pH值，并重复洗涤步骤，直到pH值达到5（通常洗涤5至6次）。把粉末放在加热块上烘干或在80-100°C的烤箱中放置数小时，直到外观干燥。

4.通过每克粉末添加20毫升2 N NaOH并搅拌或去除粉末中的蛋白质在室温下搅拌2小时。

5.重复上面的步骤3。

6.每克粉末用5毫升12.5 N NaOH处理干燥粉末，并培养过夜在95°C的密封容器中。

7.重复上述步骤3，制备干燥壳聚糖粉末。

8.称取10至50 mg提取的壳聚糖粉末，并在1%的温度下重新悬浮在1%的乙酸中mg/mL，必要时在1%醋酸中稀释。

•血清、血浆或尿液：稀释至少2倍至1%醋酸。

Cell Biolabs 相关研究方案：

1.XAN-5040:OxiSelect™ Trolox等效抗氧化能力（TEAC）检测试剂盒

2.XAN-5077:OxiSelect™ 类黄酮检测试剂盒

3.XAN-5084:OxiSelect™ 游离硫化氢检测试剂盒

艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Cell Biolabs丨艾美捷总硫醇检测试剂盒

硫醇是一种含有碳键巯基（–C–SH）的化合物。天然硫醇包括谷胱甘肽、半胱氨酸和同型半胱氨酸等化合物。硫醇代表了最大的一部分因此，动物体内的总抗氧化物池和硫醇在防止损伤方面起着重要作用来自活性氧物种。硫醇可以以自由还原态或共价二硫键形式存在与其他分子或通过巯基氨基酸的巯基连接到蛋白质上半胱氨酸。虽然硫醇可以结合各种蛋白质，但大多数蛋白质结合的硫醇都附着在血清上半胱氨酸34处的白蛋白。

除了保护细胞免受自由基应激外，硫醇在细胞凋亡和凋亡中也很重要信号传导和细胞解毒。一氧化氮在体内的作用是由一氧化氮的S-亚硝基化控制的产生S-亚硝基硫醇（SNO）的蛋白质和/或肽。有证据表明有效处理SNOs是子痫前期高血压的部分原因。慢性的肾功能衰竭与肾脏的总体硫醇水平较低有关。氧化应激已经被证实建议参与糖尿病的发病机制，以及患有2型糖尿病并发症的患者2型糖尿病患者的血清蛋白硫醇水平也较低。

Cell Biolabs 艾美捷 总硫醇分析试剂盒为检测细胞裂解物、组织、血浆、血清、唾液或尿液中的游离巯基。首先是未知将样品或标准加入96孔板中。然后，将比色探针添加到孔中与巯基共价反应，释放出一个发色团，板的吸光度为在450纳米处读取。未知样品中硫醇的含量通过与a进行比较来确定预定的还原型谷胱甘肽标准曲线。提供的试剂足以满足评估192项分析*包括标准品和未知样品。

Cell Biolabs 艾美捷该试剂的制备：

•1X分析缓冲液：将四管10X分析缓冲液混合，得到8毫升。稀释10X分析液用去离子水（72毫升）缓冲1:10，制成80毫升1X溶液。搅动或旋转同质性室温保存。

•1X比色探针：在使用前准备1X比色探针。只准备足够的立即申请。用1X分析缓冲液（例如。向980µL 1X分析缓冲液中添加20μL比色探针（50X）储备。彻底旋转。

Cell Biolabs 相关研究方案：

1.MET-5051:S-腺苷高半胱氨酸（SAH）ELISA试剂盒

2.MET-5052:S-腺苷蛋氨酸（SAM）ELISA试剂盒

3.STA-312：总谷胱甘肽检测试剂盒

4.STA-670：同型半胱氨酸ELISA试剂盒

5.STA-675：羟脯氨酸检测试剂盒

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Cell Biolabs丨艾美捷总硫醇检测试剂盒

硫化氢（H2S）是一种无色气体，含有令人想起臭鸡蛋的臭味。高水平H2S的主要成分具有腐蚀性、易燃性和毒性。H2S可由有机物分解产生当氧气不存在时（通常在沼泽和下水道中），微生物通过一种叫做厌氧消化。天然气、火山喷发物和天然气中也含有H2S一些井。人体产生微量的H2S，分子在其中起到气体的作用像一氧化碳或一氧化氮这样的信使。H2S作为脑血管扩张器产生通过胱硫醚γ裂解酶。通过激活钾ATP通道，H2S可以扩张小动脉。此外，H2S刺激血管平滑肌细胞凋亡，阻止基于增殖的血管重塑。最后，H2S已被证明具有神经保护和心脏保护作用通过提高胱氨酸和谷胱甘肽水平来降低氧化应激半胱氨酸转运到神经元。

Cell Biolabs 艾美捷 OxiSelect™ 游离硫化氢气体检测试剂盒是一种测定游离硫化氢的新技术H2S气体排放。96孔微孔板中的液体样品将H2S气体释放到空气中，而空气在含有银的凝胶斑点中捕获+样品上方微孔板盖底面上的离子。由此产生的硫化银（Ag2S）在斑点内部产生棕色可在微孔板分光光度计上进行比色测量。每个套件提供足够的试剂可执行多达100次分析，包括阳性对照和未知样本。

Cell Biolabs 艾美捷OxiSelect™ 游离硫化氢气体分析试剂盒是一种基于96孔微孔板的试剂盒H2S气体排放检测。首先，将一种含有硝酸银的溶液涂在电池的底部微孔板盖形成一个薄的聚合物捕获表面。产生H2S的样品，比如将含有H2S供体的酶、细胞或组织用移液管移入微孔板的孔中。这个然后将涂层盖置于微孔板上，使聚合物正好位于每个样品上方。硫化氢气体从井中的样品中逸出并进入聚合物涂层。Ag+聚合物中的离子发生反应与H2S气体形成Ag2S纳米颗粒，使聚合物膜产生棕色变色。一小时后，将涂层盖子转移到另一个空微孔板上，然后在室温下测量OD405纳米。

Cell Biolabs 艾美捷该试剂的制备：

1.盖子涂层混合物：将适量的聚合物基质转移到微离心管中，然后将20倍银探针溶液1:20稀释到聚合物基质中。例如，添加45µL的20X将银探针溶液稀释至855µL聚合物基质中，并充分混合。此盖子涂料混合量为足够30个眼睑斑点。盖子涂料混合物在室温下在密闭容器中稳定一天有盖的管子。

注：按比例缩放上述示例，只准备足够的立即使用。

2.硫化钠阳性对照：称取5份，制备10mM硫化钠溶液毫克固体硫化钠，并将固体以2.4 mg/mL的浓度重新注入去离子水中。然后将10 mM硫化钠1:50稀释到蒸馏水中，最终浓度为200µM。例如，对于1毫升硫化钠阳性对照品，向溶液中添加20微升10毫米硫化钠980微升去离子水。而10mM硫化钠溶液在空气中稳定长达4小时应立即制备200µM硫化钠阳性对照品，该对照品是一个盖严的试管在用于分析之前。

Cell Biolabs 相关研究方案：

1.STA-801：OxiSelect™ 体外一氧化氮（亚硝酸盐/硝酸盐）检测试剂盒（荧光法）

2.STA-802:OxiSelect™ 体外一氧化氮（亚硝酸盐/硝酸盐）检测试剂盒（比色法）

3.XAN-5040:OxiSelect™ Trolox等效抗氧化能力（TEAC）检测试剂盒（ABTS）

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Cell Biolabs丨艾美捷OxiSelect™ 类黄酮检测试剂盒

类黄酮是一系列含有苯并-γ-吡喃酮衍生物的多酚化合物，具有表明参与了许多药理反应。超过5000个自然发生的在植物中发现了黄酮类化合物，由于其独特的功能，人们对其进行了越来越多的研究抗氧化、抗菌、抗炎和抗病毒能力。类黄酮被分类根据杂环化学结构的变化分成亚组。这些因素占主导地位亚类包括黄酮醇、黄烷醇、黄烷酮、黄酮、异黄酮和花青素。他们共享由杂环吡喃环连接的两个苯环组成的碱基结构，它们在下面被标记为A、B和C。

类黄酮之间的变异程度受异戊二烯基化的模式和水平的影响，糖基化、羟基化和甲基化。环取代位置决定化学反应黄酮类化合物的活性和变异性。羟基的取代、构型和数量基团会影响金属清除和螯合的抗氧化活性。黄酮类化合物活性与代谢生物利用度取决于结构，尽管它们可能存在于无苷元的非结合态中在美国，它们主要以3-O-糖苷、甲基化衍生物和聚合物的形式存在。糖苷连杆通常出现在3或7位置。虽然苷元可以被肠道吸收，但糖苷表格必须先转换成algycans。

类黄酮的作用是通过清除金属或酶来减少活性氧（ROS）抑制，螯合产生自由基的微量元素，并上调抗氧化防御系统。该药具有抗炎、抗病毒、抗癌、保肝等特点黄酮类化合物正在创造新的研究和药物开发领域。这方面还需要进一步研究类黄酮的结构和功能关系，以了解和利用其治疗作用特点。

Cell Biolabs 艾美捷 细胞生物实验室的OxiSelect™ 类黄酮测定试剂盒是一种定量测定类黄酮的试剂盒各种样本中的含量，如血浆、尿液、植物组织匀浆、细胞提取物和纯净的食物或药物提取物。该分析可用于评估纯化的或混合的类黄酮。该反应也是由基本类黄酮结构的清除和螯合能力驱动的定义它的羟基和酮基。该试剂盒以槲皮素为标准允许用户确定样品中的类黄酮含量，并将其表示为槲皮素当量（QE）。槲皮素是从黄酮醇中提取的一种普遍存在的类黄酮子类范畴。每个试剂盒提供的试剂足以进行多达200次分析，包括标准曲线和未知样本。由于样品中黄酮类化合物的变异性可在不同波长下测量，以确定类黄酮含量。

Cell Biolabs 艾美捷OxiSelect™黄酮类化合物检测试剂盒提供了一种简单有效的分析方法，用于评估植物中黄酮类化合物的含量微孔板格式的样品。

Cell Biolabs 艾美捷OxiSelect™ 类黄酮含量测定试剂盒化验原理：

是一种定量测定类黄酮含量的试剂盒在一个样本内。引发溶液与类黄酮环反应以增强反应性和稳定性黄酮类化合物的检测。接下来是铝离子溶液（Al3+)添加，与类黄酮结构中的羟基和酮基。最后，一个羟基稳定了环化学和增强颜色发展。颜色发展可能发生在整个过程的各个阶段由于样品中类黄酮的性质而产生的反应。孵育几分钟后在405-450 nm处测量样品吸光度。样品可与槲皮素标准品进行比较用于测定类黄酮含量。该分析对约2µg/mL的槲皮素等同物。

Cell Biolabs 相关研究方案：

1.STA-312：OxiSelect™总谷胱甘肽检测试剂盒

2.STA-340：OxiSelect™超氧化物歧化酶活性测定

3.STA-341：OxiSelect™过氧化氢酶活性检测试剂盒

4.STA-342：OxiSelect™细胞内活性氧检测试剂盒（绿色荧光）

5.STA-345：OxiSelect™ORAC活性测定

6.STA-347：OxiSelect™体外ROS/RNS检测试剂盒（绿色荧光）

7.STA-360：OxiSelect™总抗氧化能力（TAC）检测试剂盒

8.STA-802：OxiSelect™体外一氧化氮（亚硝酸盐/硝酸盐）检测试剂盒

9.STA-803：OxiSelect™髓过氧化物酶活性测定试剂盒（比色法）

10.STA-812：OxiSelect™谷胱甘肽还原酶检测试剂盒

11.STA-860：OxiSelect™抗坏血酸检测试剂盒（FRASC）（比色法）

12.XAN-5040:OxiSelect™ Trolox等效抗氧化能力（TEAC）检测试剂盒（ABTS）

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Cell Biolabs丨艾美捷紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒

吸收紫外线（UV）会产生两种主要类型的DNA损伤，即环丁烷嘧啶二聚体（CPD）和嘧啶（6-4）嘧啶酮光产物（6-4PP）。这个结果是C向T和CC向TT的转变，这两种突变都是p53常见的突变人类和小鼠皮肤癌。紫外线损伤的DNA通常通过核苷酸切除修复（NER）或基底切除修复（BER）。紫外线照射后，细胞激活p53并使细胞周期停滞一段时间修理如果损伤太严重，细胞会触发凋亡以清除受损的DNA，潜在的突变细胞。

Cell Biolabs 艾美捷 OxiSelect™ 氧化紫外诱导DNA损伤ELISA试剂盒（CPD定量）是一种酶免疫分析法用于快速检测和定量任何DNA样本中的CPD。未知样品中的CPD量通过比较其吸光度与a的吸光度来确定已知CPD-DNA标准曲线。每个试剂盒提供足够的试剂，可进行多达96次分析，包括标准曲线和未知样本。

CDP-DNA标准品或未知DNA样品在吸附到载体上之前首先进行热变性96孔DNA高结合板。样本或标准品中的CPD用抗PD抗体探测，然后用HRP结合的二级抗体探测。未知环境中的CPD内容通过与根据预定CPDDNA标准制备的标准曲线进行比较，确定样品。

Cell Biolabs 艾美捷该试剂盒组成：

1.DNA高结合板（Part No. 232404）：一个96孔条板。

2.DNA结合溶液（Part No. 232405）：一个6毫升的瓶子。

3.抗CPD抗体（Part No. 232202）：一个20µL小瓶。

4.二级抗体，HRP结合物（Part No. 10902）：一个50µL小瓶。

5.分析稀释剂（Part No. 310804）：一个50毫升的瓶子。

6.10倍洗涤缓冲液（Part No. 310806）：一个100毫升的瓶子。

7.基质溶液（Part No. 310807）：一个12毫升琥珀色瓶。

8.停止溶液（Part No. 310808）：一个12毫升的瓶子。

9.CPD-DNA标准品（Part No. 232203）：一瓶100µL的25μg/mL CPD-DNA，装在1X TE中缓冲器

10.还原DNA标准品（Part No. 232207）：一个100µL小瓶的0.2 mg/mL还原DNA在TE中缓冲器

Cell Biolabs 相关研究方案：

1.STA-320：OxiSelect™氧化DNA损伤ELISA试剂盒（8-OHdG定量）

2.STA-321：OxiSelect™DNA双链断裂（DSB）染色试剂盒

3.STA-323：OxiSelect™紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（6-4PP定量）

4.STA-324：OxiSelect™氧化DNA损伤定量试剂盒（AP位点）

5.STA-325：OxiSelect™氧化性RNA损伤ELISA试剂盒（8-OHG定量）

6.STA-326：OxiSelect™细胞紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（CPD）

7.STA-327：OxiSelect™细胞紫外线诱导DNA损伤染色试剂盒（CPD）

8.STA-328：OxiSelect™细胞紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（6-4PP）

9.STA-329：OxiSelect™细胞紫外线诱导DNA损伤染色试剂盒（6-4PP）

艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Cell-Biolabs.shtml

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诊断级牛血清白蛋白粉末的广泛应用

牛血清白蛋白BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体”作用，不少酶类添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，并可实现重复切割。在37℃，酶切反应超过1h时，BSA可以使酶更加稳定，因为在不含BSA的反应缓冲液中，许多限制性内切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质。

用途：

1、用于生化研究、遗传工程和医药研究

2、用作医药保健食品、调味品

3、维持渗透压、pH缓冲、载体作用

4、在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性，可以提高PCR的效率

艾美捷牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为封闭试剂.血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用.在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

艾美捷牛血清白蛋白粉末,热处理,诊断级是以USDA认证的牛源血浆作为原料，使用砖利的热处理方法灭活蛋白酶并经过进一步的非溶液步骤去除脂肪和其它血浆蛋白.诊断级牛血清白蛋白粉末是专门用于减少可能会产生背景干扰以及细胞培养体系抑制等因素，该牛血清白蛋白不含蛋白酶，不含或具有很低活性的内毒素、生物负载以及IgG等。

另外，该诊断级牛血清白蛋白可用于蛋白标准品、稀释剂、偶联物或者酶稳定剂，也可以应用于高灵敏度的免疫分析实验、细胞培养以及杂交实验等.另有5kg以及10kg等更大规格包装，是目前较高质量的牛血清白蛋白（BSA）科研用品。

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SOS1 Ras GEF蛋白的应用和制备方法

SOS1 Ras GEF 蛋白应用领域：

1.SOS1 GTP交换活性抑制剂的研究

2.SOS1结合蛋白的鉴定

3.不同GTP酶对SOS1-GEF活性的研究

SOS1 Ras GEF蛋白材料：

人类SOS1交换域（564-1049）蛋白（SOS1 ExD）已在细菌表达系统中产生。重组蛋白的氨基末端含有一个6组氨酸标签（His标签）。SOS1 ExD蛋白的分子量约为61 kDa。蛋白质以冻干白色粉末的形式提供。

SOS1 Ras GEF 蛋白存储：

应通过添加33μl蒸馏水将蛋白质重组至50µM（3.03 mg/ml）。蛋白质将在以下缓冲液中：17 mM Tris pH 7.5、17 mM NaCl、0.2 mM MgCl2、2.3%蔗糖和0.3%右旋糖酐。为了保持蛋白质的高生物活性，强烈建议将蛋白质溶液分为“实验大小”的等份，并在液氮中快速冷冻。该蛋白质可在-70°C下储存6个月。避免反复的冻融循环。冻干蛋白质在4°C下干燥保存（湿度<10%）1年。

SOS1 Ras GEF 蛋白纯度：

蛋白质纯度通过在4-20%聚丙烯酰胺梯度凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白质的密度测定来确定。确定SOS1 ExD蛋白纯度>90%。

SOS1 Ras GEF 蛋白试剂：

1.重组Ras蛋白

2.重组SOS1 ExD蛋白（Cat.#GE02）

3.2倍交换缓冲液（40 mM Tris pH 7.5，100 mM NaCl，20 mM MgCl2，0.1 mg/ml BSA，1.5μM mant GTP）

4.稀释缓冲液（20 mM Tris pH 7.5，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，0.1 mg/ml BSA）

SOS1 Ras GEF 蛋白方法：

1.用稀释缓冲液将SOS1 ExD蛋白（Cat#GE02）稀释至6μM（0.36 mg/ml）。

2.用稀释缓冲液将Ras稀释至50μM（1.1 mg/ml）。

3.将冻干的2x交换缓冲液溶解在5mL Milli-Q水中，并在室温下保存。

4.设置平板读取器进行动态荧光测量（激发波长为360 nm，发射波长为440 nm），每30秒读取一次，持续30分钟。

5.加入以下成分，轻轻移液混合：

交换反应混合物/96孔黑板

2倍交换缓冲液/50μl

dH2O/36μl

50μM Ras/4μl

6.在各自的孔中移取10μl 6μM SOS1 ExD蛋白质或稀释缓冲液，立即上下移取两次，并开始读取荧光。

7.一旦读数完成并保存了读板器文件，就可以使用读板器附带的软件将数据减少到Vmax来计算汇率。

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Abbkine丨IP/Co-IP常见问题解答方案

IP：通过对某蛋白质的富集，研究该蛋白的特性（如翻译后修饰等）。

Co-IP: 通过对某蛋白质的富集，研究与其结合的其他蛋白（即蛋白-蛋白相互作用、蛋白复合物等）。

关键试剂选择：使用可以富集蛋白的抗体是Co-IP的前提，因此，适用于IP的抗体都可应用于Co-IP。

今天和Abbkine一起来看看关于IP/Co-IP常见问题和解决办法：

Q：如何避免轻重链的干扰？

A：1、IP一抗与WB一抗来源一致或者两种抗体来源不一致时，二抗有交叉反应，使用IPkine二抗可以避免轻重链的干扰。2、靶蛋白丰度较低，仪器延长曝光时间，导致IgG阴性对照出现杂带：增加Input和IP泳道上样量，减少曝光时间，防止轻重链（杂带）的干扰；3、阴性对照IgG和IP一抗加入偏多：对照IgG抗体量较多，易导致杂带形成，阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。

Q：IP/Co-ip实验中IgG阴性对照的意义是什么？

A：排除污染的可能性，例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质，若没有设置IgG的对照，而操作中有非特异性蛋白质，又和设计的抗体有作用，就会出现阳性的结果。如果做了lgG阴性对照，对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白，对照出现阳性，说明抗体有非特异结合到杂蛋白的可能，需要重新开始实验。

Q：互作蛋白信号弱怎么办？

A：互作蛋白信号弱可能是由于裂解液中的去垢剂浓度太高或配方过于剧烈、蛋白与蛋白之间的相互作用太弱或不太稳定等原因导致。

相应的举措有：

1、降低去垢剂浓度或更换去垢剂种类；

2、受蛋白的亚细胞定位影响，则新选择裂解液配方来释放目的蛋白；

3、选择亲和力更高的抗体以捕获更多的目的蛋白，从而捕获更多的相互作用蛋白；

4、选择目的蛋白或相互作用蛋白含量高的样品进行免疫共沉淀实验。

Q：通过WB验证发现，没有想要的目的条带

A：没有目的条带可以是诸多原因导致的。

1、有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，且所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。

2、有可能是抗体浓度太低导致条带较浅，则需要调整IP或IB抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度。

3、抗体亲合力太低，选用适合于IP或IB的相应抗体；

4、有可能IP抗体未与琼脂糖/磁珠结合。此种情况则需要选选用适合于IP的相应珠子，正确保存防止变质或干燥。

5、若Tag未暴露在融合蛋白构象的表面，则需要改变tag融合表达部位。

6、裂解液盐碱度太高，则需要改用低盐碱度裂解液。

7、目的蛋白在样本中表达量低或者不表达，则需首先对目的蛋白表达量进行检测，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并进行预处理。

8、目的蛋白未被洗脱可能导致没有条带，须保证使用合适的洗脱液，保证洗脱液的强度和pH值合适。

9、抗体选择不当或者不工作，则须利用WB对抗体进行验证。

Q：通过WB验证发现，虽然可见目的条带，但是背景很高

A：背景高可能由多方面原因造成：

1、由非特异蛋白结合导致背景高。若要避免非特异性蛋白结合，则需要在无血清溶液中裂解细胞，且在免疫沉淀前用protein (G/A)珠子预洗免疫沉淀后增加漂洗次数和盐碱度（高盐或去垢剂）。

2、实验仪器或液体被污染。使用洁净的仪器或液体。

3、转移膜上的非特异吸附导致背景高。实验操作过程中戴手套，使用镊子夹取，不要接触膜转移面。

4、制备样品中可能有不完全溶解的大的蛋白复合体，则在制备样品后进行短暂超声处理（3次，每次5秒钟），然后离心纯化，取上清后进行后续试验。

5、洗涤不彻底，则需要多次洗涤，并逐渐增加洗涤缓冲液中的NaCl和去垢剂浓度。

6、可能有非特异性蛋白吸附于珠子上，则须进行Preclearing以排除非特异性吸附。

7、抗体本身特异性不好可能导致背景高，则须选择合适的抗体，可以考虑单抗。

8、使用了过多的细胞或组织进行裂解导致背景高，则须减少样本量，推荐100-500μg细胞裂解物。

9、蛋白降解也可能出现高背景的情况，次情况下须保证样品中加入了蛋白酶/磷酸酶抑制剂，尽量使用新鲜制备的样品。

来源：https://www.abbkine.cn/ip-co-ip-5/