G-Biosciences Pearl IgG纯化树脂：超快15 分钟内纯化

G-Biosciences Pearl IgG纯化树脂：超快15 分钟内纯化

艾美捷G-Biosciences Pearl™ IgG 纯化树脂 允许从血清中一步纯化免疫球蛋白 G (IgG) 抗体。树脂结合高丰度的非 IgG 蛋白（即白蛋白）并允许 IgG 分子在生理缓冲液中通过。纯化的 IgG 分子可以储存或用于进一步的下游应用，无需进一步清理，例如硫酸铵沉淀。

艾美捷G-Biosciences Pearl™ IgG 纯化 Resin 可在 <15 分钟内纯化 IgG，比常用的更快蛋白A和蛋白G树脂。Pearl™ IgG 纯化树脂的性能与蛋白 A 和蛋白 G 树脂相当或更好。

也可用是完整的IgG 纯化试剂盒，有两种格式：

用于快速、小规模纯化 IgG 的离心式试剂盒。该试剂盒随附 3ml Pearl™ IgG 纯化树脂、IgG 分离缓冲液和 20 个离心柱。适用于纯化高达 25mg 的 IgG。

更大规格的试剂盒配有 25ml Pearl™ IgG 纯化树脂和 IgG 分离缓冲液，适用于从 ~100ml 血清（~200mg IgG）中分离 IgG。

G-Biosciences Pearl™ IgG 纯化树脂特征：

简单的 1 步纯化，消除蛋白质 A 和 G 结合和洗脱步骤

高回收率 (>90%) 和纯度 (>80%)

从与蛋白 A 和 G 不兼容的来源中纯化 IgG

G-Biosciences Pearl™ IgG 纯化树脂应用：

IgG（免疫球蛋白 G）分子的纯化

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究，广泛应用于学术研究和工业制造领域，包括：蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/G-Biosciences.shtml

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Protein A/G磁珠原料：使用方便，结合力高，不粘珠

Protein A/G磁珠是通过共价偶联制备的重组融合蛋白A/G（包含8个IgG结合磁畴，BV目录#6502）至6%的磁性交联珠状琼脂糖。对耦合技术进行了优化，以提供高IgG结合能力。IgG结合能力通常为每毫升湿凝胶中人IgG含量大于10毫克。

艾美捷 G-Biosciences Protein A/G磁珠特征：

使用方便，结合力高，不粘珠。适用于IgG抗体的免疫沉淀和富集。高亲和力用于多种物种IgG抗体的Fc区。蛋白质A/G与各种哺乳动物的所有IgG亚类结合，包括结合蛋白A和蛋白G的所有IgG单独使用，使其成为净化各种多克隆或单克隆IgG抗体。

艾美捷 G-Biosciences Protein A/G磁珠原料使用注意事项：

1.仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3.IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/WashBuffer 的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

4.磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。

艾美捷 G-Biosciences Protein A/G磁珠原料相关研究：

Recombinant Protein A Protein A Sepharose Protein A Magnetic Beads Recombinant Protein G Protein G Sepharose Protein G Magnetic Beads Recombinant Protein L Protein L Sepharose Protein L Magnetic Beads Recombinant Protein A/G Protein A/G Sepharose Protein A/G Magnetic Beads Recombinant Protein A/G/L Protein A/G/L Sepharose Protein A/G/L Magnetic Beads Protein G Polyclonal Antibody Protein G-Biotin Protein G-FITC Protein A Polyclonal Antibody Protein G Coated Plate Protein L Polyclonal Antibody

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究，旨在提供试剂、特殊化学品、缓冲液、分析、应用试剂盒等各类研究工具。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/featured/KLH-BSA.shtml

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中英文说明书丨人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒

Specification：

Product name：EliKine™ Human Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA Kit

Reactivity：Human

Applications：ELISA

Applications notes：EliKine™ Human Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA Kit employs a double antibody sandwich method to quantitate Human AFP in samples. An antibody specific for Human AFP has been pre-coated onto a microplate. Standards and samples are pipetted into the wells and any Human AFP present is bound by the immobilized antibody. After removing any unbound substances, an HRP-conjugated antibody specific for Human AFP is added to the wells. After washing, remove any unbound HRP-conjugated antibody reagent, adding HRP Substrate (TMB), TMB turns blue under the catalysis of HRP, and turns yellow after adding stop solution. Measure the OD value with a microplate reader at 450 nm wavelength. The Human Alpha Fetoprotein (AFP) concentration is proportional to the OD450 nm value.

Detection method Colorimetric

SampleType：Cell culture supernatants, Plasma, Serum

Assay type：Sandwich ELISA (quantitative)

Assay duration：Multiple steps standard sandwich ELISA assay with a working time of 3.5 hours. It depends on the experience of the operation person.

Product Properties：

Kit components：

• Human AFP Microplate

• Human AFP Standard (lyophilized)

• Sample Diluent (5×)

• Assay Buffer (5×)

• HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody (100×)

• HRP Substrate（TMB）

• Stop Solution

• Wash Buffer (20×)

• Plate Covers

Features & Benefits：EliKine™ Human Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA Kit has high sensitivity and excellent specificity for detection of Human Alpha Fetoprotein (AFP), No significant cross-reactivity or interference between Human Alpha Fetoprotein (AFP) and analogues was observed.

Calibration range：0.625-40 ng/mL

Limit of detection：0.313 ng/mL

Abbkine人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒实验建议：

EliKine™ 人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒采用双抗体夹心法来定量样品中的人甲胎蛋白（AFP）。抗人甲胎蛋白（AFP）的特异性抗体包被于酶标板上，将样品或标准品加入酶标板的孔中，其中的人甲胎蛋白（AFP）会与包被在板上的固相抗体结合。未结合的成分被洗去，然后将HRP偶联的抗人甲胎蛋白（AFP）特异性抗体加入孔中。在洗涤去除未结合的HRP 偶联抗体后，加入显色底物（TMB），TMB 在 HRP 催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450 nm 波长处测OD 值，人甲胎蛋白（AFP）浓度与 OD450 值之间呈正比。

EliKine™ 人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒优势：

其检测具有高灵敏度和优良的特异性，未观察到和人甲胎蛋白（AFP）类似物之间的显着交叉反应或干扰。

使用中注意事项：

1. 如果 Sample Diluent (5×)和 Assay Buffer (5×)出现颜色变黄，少量沉淀等现象，是因为试剂中含有血清导致，离心去掉沉淀即可，不影响正常使用。

2. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。

3. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。

4. 为确保准确的结果，在孵育步骤中必须正确粘附板贴。

5. Stop Solution 有一定的腐蚀性，操作时请做好防护措施。

来源：https://www.abbkine.cn/product/ket6037/

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中英文说明书丨 AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒

Specification：

English name of product：annexin v-abfluor ™ 488 Apoptosis Detection kit (Green Fluorescence)

Experimental suggestion：annexin v-abfluor developed by abbkine ™ 488 cell apoptosis detection kit (green fluorescence) contains abbkine's proprietary abfluor ™ 488 annexin V labeled with green fluorescent dye can identify and quantify apoptotic cells by flow cytometry or fluorescence microscope

Product Properties：

Kit components：

• annexin V binding buffer (5x)

• Annexin V- AbFluor ™ four hundred and eighty-eight

• Propidium Iodide (PI)

Features & advantages：

• abbkine abfluor ™ 488 is an excellent substitute for FITC, which not only has better fluorescence intensity and photostability, but also is not affected by pH

• Annexin V- AbFluor ™ 488: Ex/Em = 491/517 nm; Pi: ex/em = 535/617 nm (DNA dye)

• suitable for flow cytometry and fluorescence microscopy

It is suggested that it can be stored stably for 6 months at 4 ° C from the date of shipment. Please keep away from light and freezing.

Transportation conditions: blue ice transportation

Abbkine AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒实验建议：

Abbkine Annexin V-AbFluor™ 488 细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光）含有Abbkine专有的AbFluor™ 488 绿色荧光染料标记的Annexin V，可通过流式细胞仪或荧光显微镜对凋亡细胞进行鉴定和定量。

AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒优势：

• Abbkine AbFluor™ 488 是FITC的优质替代物，不仅荧光强度和光稳定性更好，而且不受pH的影响

• Annexin V- AbFluor™ 488: Ex/Em = 491/517 nm; PI: Ex/Em = 535/617 nm (DNA染料)

• 适用于流式细胞术和荧光显微镜

AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒实例展示：

图：用4种不同浓度（0、1:8000、1:4000、1:2000、1:1000）的喜树碱诱导Hela细胞24小时，并用Annexin V-AbFluor染色™ 488凋亡检测试剂盒。AbFluor的组合™ 488和碘化丙啶允许区分早期凋亡细胞（膜联蛋白V-AbFluor）™ 488阳性），晚期凋亡和/或坏死细胞（膜联蛋白V-AbFluor）™ 488和碘化丙啶阳性），以及活细胞（未染色）。

来源：https://www.abbkine.cn/product/kta0002/

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Worthington毒液中核酸外切酶的特征及相关文献 

毒液核酸外切酶（磷酸二酯酶 I）连续水解来自 3'-羟基末端的核糖和脱氧核糖寡核苷酸的 5'-单核苷酸。Laskowski, Sr. (1971) 对其进行了审查。

该酶已被广泛用作核酸结构和序列研究的工具（Ho 和 Gilham 1973）。

艾美捷Worthington Crotalus adamanteus毒液中核酸外切酶的特征：

分子量：115,000 (Philipps 1975)。

成分：一种结合刀豆蛋白 A 的糖蛋白。（Sulkowski 和 Laskowski 1961）。

最佳 pH 值：9.8-10.4 (Philipps 1975)。

抑制剂：还原剂，如谷胱甘肽、半胱氨酸和抗坏血酸（Razell 1963）。它被 5 mM EDTA 完全抑制，而 ATP、ADP 和 AMP 是部分抑制剂。

活化剂：酶对Mg 2+有绝对需求；Philipps (1975) 指出最佳浓度为 15 mM。

特异性：该酶已被 Dolapchiev等人纯化。(1974) 和 Sulkowski 和 Laskowski, Sr. (1961)，内切核酸酶活性以及 5'-核苷酸酶和非特异性单磷酸酶被消除。

它对核苷酸的碱基或糖部分是非特异性的。多种合成底物被水解。参见 Razell (1963) 的评论。Ogilvie 和 Hruska (1976) 指出核酸外切酶不能识别 syn 构象中的核苷单元。另见 Philipps 和 Chiemprasert (1975)。

ADP-核糖基化蛋白在焦磷酸键处被毒液磷酸二酯酶切割，产生磷酸核糖-AMP (Hayaishi 1976)。

艾美捷Worthington Crotalus adamanteus毒液中核酸外切酶相关研究：

白蛋白，无核酸酶 (BSANF)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

E•RASE RNase A/T1 混合物 (RCT)

组蛋白 (H, NHL)

溶菌酶 (LY/LYSF)

核酸酶，微球菌 ( NFCP)

核酸酶，S1 (SINUC/SINUCL)

核酸，DNA，大肠杆菌，λ/片段，RNA

磷酸酶，碱性 (CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)

磷酸二酯酶 II (SPH)

蛋白酶 K (PROK/PROKS)

逆转录酶，重组 HIV (RTHIV)

核糖核酸酶 A (R/RAF/RASE/RS/RPDF)

核糖核酸酶 T1，无动物源 (RT1S)

相关文献：

1.Bruns, M. 和 Philipps, G.： 毒液磷酸二酯酶对大肠杆菌氨酰-tRNA 的作用 ， Biochim Biophys Acta 217 , 189, 1970

2.Burgers, P.、Eckstein, F. 和 Hunneman, D.：蛇毒磷酸二酯酶水解的立体化学， J Biol Chem 254 , 7476, 1979

3.Cheung, W.: Cyclic 3',5'-Nucleotide Phosphodiesterase: Pronounced Stimulation by Snake Venom, Biochem Biophys Res Commun 29 , 478, 1967

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington磷脂酶A2研究丨磷脂酰胆碱2-乙酰水解酶

磷脂酶 A2 代表一类热稳定的钙依赖性酶，可催化 3-n-磷酸甘油酯的 2-酰基键水解。这种酶被命名为磷脂酶 A2 以表示其 2-酰基特异性 (Uthe 1971)。

已从胰腺、蛇和蜜蜂毒液中分离出磷脂酶 A2。福斯特等人。(1986)，陈等人。(1982), Coulard等人。（1987 年）和 Horigome等人。（1987 年）关于血小板磷脂酶 A2 的报告。Verheij等人已经报道了人类胰腺 PLA2 的一级结构。（1983 年）。

磷脂酶参与脂质代谢，是生物膜结构-功能关系的重要探针。道森 1973 年）。

艾美捷Worthington 磷脂酶 A2化学性质：

组成：

两种表现出磷脂酶 A 活性的蛋白质（A 2- α、A 2- β）已从Crotalus adamanteus中分离出来（Saito 和 Hanahan 1962，以及 Wells 和 Hanahan 1969）。每种蛋白质都由二聚体亚基组成（Wells 1971）。这两种蛋白质具有相似的活性，但在色谱和电泳上是不同的。海因里克森等人。(1977) 报道了这两种酶的独特结构特征和磷脂酶 A2-α 的完整氨基酸序列。这两个亚基在一个氨基酸上不同； A 2- α 在残基 117 处含有谷氨酰胺，而酸性更强 的 A 2- β 在该残基处含有谷氨酸。

蛋白质登录号：P00623 

分子量：30,000 (Wells 1969)

消光系数：  消光系数= 22.7 (Wells 1969)

等电点：A-α 和 A-β 分别为 4.55 和 4.40 (Saito 1962)

活化剂：钙离子 (Dennis 1973)

抑制剂：锌、钡和锰离子（Golec等人1992 和 Uthe 1971）

特异性：该酶特异性催化 L- α 磷酸甘油酯的β-脂肪酯键的水解 (Van Deenen 1963)。

艾美捷Worthington 磷脂酶 A2 检测：

Method : 源自滴定测定程序的磷脂酶 A2 制剂的活性值可能完全取决于卵磷脂的来源和类型、其作为底物乳液的制备、反应混合物的其他组分以及使用的方法学/仪器。文献中报道的高纯度毒液磷脂酶 A2 的值范围为 200 至 3000 单位/mg。分析系统之间的比较是困难的。已发现以下测定在我们的实验室中是可重复的。在特定条件下，一个单元在 pH 8.9 和 25°C 下每分钟从卵磷脂乳液中释放 1 个微摩尔可滴定脂肪酸。

试剂：

0.1 M 氯化钙

1.0 M 氯化钠

卵磷脂乳液：在 250 ml 烧杯中称取 4.0 克试剂级大豆卵磷脂，加入 30 ml 1.0 M 氯化钠、10 ml 0.1 M 氯化钙和 100 ml 试剂级水。在 4°C 下搅拌 30 分钟后，在 Branson 超声波仪或同等设备上以最大功率对混合物进行 10 分钟的超声波处理。用试剂级水稀释至终体积为 200 ml。

0.01-0.02 N NaOH - 标准化

酶：

将酶以 1.0 mg/ml 的浓度溶解在试剂级水中。在运行测定时将此储备溶液保持在冰上。使用前立即在试剂级水中进行进一步稀释。

程序：

可以使用自动滴定仪或实验室 pH 计进行滴定。反应容器应保持在 25°C。

空白率测定：将 15 ml 卵磷脂乳液移入 25°C 的反应容器中。将 pH 值调节至 8.9，并在获得恒定速率后记录将 pH 值保持在 8.9 3-5 分钟所需的滴定剂体积。将“空白速率”确定为从曲线的最后线性部分每分钟添加的滴定剂体积。

样品测定：在上述乳液中加入适当稀释的酶。记录将 pH 值保持在 8.9 4-5 分钟所需的滴定剂量。从曲线的线性部分确定“采样率”为每分钟添加的滴定剂体积。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington血浆胺氧化酶 (PAO) 说明书

血浆胺氧化酶 (PAO) 催化反应：

RCH 2 NH 2 + O 2 + H 2 O → RCHO + NH 3 + H 2 O 2

牛血浆胺氧化酶的分子量为 170 kDa，精胺的最适 pH 值为 6.2，亚精胺的最适 pH 值为 7.2。胺氧化酶分为两类：血浆胺氧化酶所属的含吡哆醛和铜的酶，以及含FAD的氨基氧化酶。天然底物包括儿茶酚胺、色胺衍生物和其他生理活性胺。血浆胺氧化酶用于需要氮基转移的研究。该分子由两条相同的多肽链组成。每个分子有两个磷酸吡哆醛和两个 Cu +原子。牛血浆胺氧化酶受铜螯合剂、许多羧基试剂如铜酮、羟胺和氰化物的抑制。苯甲酸和苯甲醇都是非竞争性抑制剂（KI = 30 和 34mM 分别）。Worthington 采用的测定胺氧化酶的测定法基本上是 Tabor等人，JBC， 208，645，(1954) 的测定法，反应温度降至 25°C。

艾美捷Worthington 血浆胺氧化酶 (PAO)化学性质：

稳定性/储存： -20°C 可稳定保存 12 个月。储存在-20°C。

单位定义：在 25°C、pH 7.2 条件下，1 个国际单位每分钟氧化 1µmole 苄胺。

技术说明： 1 IU 等于 4,330 Tabor 单位。(TU)

艾美捷Worthington 血浆胺氧化酶 (PAO)测定方案： 

方法: Kapeller-Adler (1971) 彻底审查了胺氧化酶的测定。Worthington 采用的方法本质上是 Tabor等人的方法。(1954) 反应温度降至 25°C。

反应速度由苄胺氧化引起的 250 nm 处吸光度的增加来确定。在指定条件下，在 25°C 和 pH 7.2 条件下，一个单位会导致每分钟氧化 1 微摩尔苄胺。如此定义的一个国际单位相当于 4330 个泰伯尔单位（泰伯尔和泰伯尔，1972 年）。

试剂：

67 mM 磷酸钾缓冲液 pH 7.2

1.0% v/v (0.10 M) 苄胺（如果有颜色，重新蒸馏）在 67 mM 磷酸钾缓冲液中，pH 7.2（底物）

酶：

在 67 mM 磷酸钾缓冲液（pH 7.2）中溶解至浓度为 10 mg/ml。

程序：

将分光光度计调整到 250 nm 和 25°C。将 2.8 ml 缓冲液和 0.1 ml 底物溶液倒入每个比色杯吸管中。

在分光光度计中孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并建立空白率（如果有）。加入 0.1 ml 酶溶液并记录 A 250增加6-8 分钟。从曲线的线性部分计算 ΔA 250 /分钟。可能会出现 2-3 分钟的延迟，之后反应应与 A 250为 0.75 呈线性关系。

艾美捷Worthington 血浆胺氧化酶 (PAO)相关参考文献：

1.Achee, F., Chervenka, C., Smith, R., and Yasunobu, K.: XII. The Association and Dissociation, and Number of Subunits of Beef Plasma Amine Oxidase , Biochemistry 7, 4329, 1968

2.Bachrach, U.: Metabolism and Function of Spermine and Related Polyamines , Annu Rev Microbiol 24, 109, 1970

3.Bachrach, U.: Function of Naturally Occurring Polyamines,, Academic Press, NY, , 1973

4.Bachrach, U., and Reches, B.: Enzymic Assay for Spermidine , Anal Biochem 17, 38, 1966

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington蘑菇多酚氧化酶的特性及测定方案

多酚氧化酶（酪氨酸酶）（TY）是一种双功能的含铜氧化酶，具有儿茶酚酶和甲酚酶活性（Malmström 和 Rydén 1968）。

乔利等人。(1974) 将其称为氧和 4 电子转移酚氧化酶。它负责整个系统发育规模的褐变反应。尽管已经纯化了粗糙脉孢菌的酪氨酸酶（Fling et al . 1963），但大部分工作都是用蘑菇酶完成的，尽管产量和一致性都很差；Smith and Krueger (1962) 证明了它的多样性。Bouchilloux等人。(1963) 获得了四种酶。

艾美捷Worthington 蘑菇多酚氧化酶的特性：

分子量：128,000 (Duckworth and Coleman 1970)。

组成：该酶是一种四聚体，每个分子含有 4 克铜原子 (Jolley et al . 1974)，以及包括酚底物在内的芳香族化合物的两个结合位点。还有一个明显不同的氧结合位点，即铜位点（Duckworth and Coleman 1970）。铜可能处于亚铜状态；该酶的失活与Cu 2+的增加有关。（Kertész等人，1972 年）。氨基酸组成已确定。Jolley等人报道了广泛的结构研究。（1969）；和达克沃斯和科尔曼（1970）。另见 Jolley等人。（1972 年、1973 年和 1974 年）。

最佳 pH 值：6.0-7.0。

消光系数：消光系数= 24.9（纯化后立即）（Duckworth 和 Coleman 1970）。

抑制剂：与铜络合的化合物。该酶还被苯甲酸对儿茶酚和氰化物对氧的竞争性抑制（Duckworth 和 Coleman 1970）。

艾美捷Worthington 多酚氧化酶活性：

多酚氧化酶是一种氧转移酶。除了使用 O 2催化邻苯二酚脱氢生成邻醌和苯酚邻羟基化生成邻苯二酚外，Strothkamp 和 Mason (1974) 还报道了过氧化物酶活性。Kertész等人已经报道了动力学研究。（1971）。另见 Malmström 和 Rydén 的评论。

特异性：大量对位取代的儿茶酚被氧化（Duckworth 和 Coleman 1970）。

稳定性：冻干制剂在 -20°C 下可稳定保存 6-12 个月。

艾美捷Worthington 多酚氧化酶测定：

方法：多酚氧化酶将酪氨酸氧化为二羟基苯丙氨酸，二羟基苯丙氨酸又被氧化为邻醌。后者伴随着 280 nm 处吸光度的增加。增加的速率与酶浓度成正比，并且在初始滞后后的 5-10 分钟内呈线性关系。在指定条件下，在 25°C、pH 6.5 下，一个单位在 280 nm 处引起每分钟 0.001 的吸光度变化。

试剂：

0.5 M 磷酸钾缓冲液，pH 6.5

0.001 M L-酪氨酸

酶：

以 1 mg/ml 的浓度溶解在试剂级水中。在试剂级水中进一步稀释至 200-400 单位/毫升的浓度。

程序：

将分光光度计调整到 280 nm 和 25°C。将移液器移入每个比色皿，如下所示：

0.5 M 磷酸盐缓冲液，pH 6.5 1.0 毫升

0.001 M L-酪氨酸 1.0 毫升

试剂级水 0.9 毫升

通过毛细管将氧气鼓泡到比色皿中 4-5 分钟，使该反应混合物充氧。将比色皿转移到分光光度计并记录 A 280 4-5 分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。加入 0.1 ml 适当稀释的酶，记录 A 280 10-12 分钟。从曲线的线性部分确定 ΔA 280 。预计会有 2-3 分钟的非线性“滞后”。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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说明书丨Worthington蛋白酶 K特性及参考文献

天然蛋白酶 K，产品代码 PROK 和 PROKS 已停产并被重组蛋白酶 K，产品代码 PROKR 和 PROKRS 取代。重组产品符合与天然产品相同的规格。

蛋白酶 K 是一种丝氨酸蛋白酶，对脂肪族、芳香族和其他疏水性氨基酸具有广泛的特异性。PROK 的分子量为 27,000 道尔顿，并且是 Ca 2+依赖性的。它不会被 EDTA、巯基试剂、PCMB、TLCK 或 TPCK 等金属离子螯合剂灭活。它还在 0.5% SDS 中保持活性。它可以被 PMSF 或 DFP 抑制。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K化学性质：

稳定性/储存： 冻干粉在 2-8°C 下可稳定一年。含 1mM CaCl 2的 50mM Tris-HCl，pH 8.0 溶液在 2-8°C 下可稳定数月。储存在 2-8°C。

单位定义：一个单位在 37°C、pH 7.5 下，使用尿素变性血红蛋白作为底物，释放 1 微摩尔 Folin 阳性氨基酸，以酪氨酸计。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K测定：

蛋白酶 K 测定：

Method : 蛋白酶 K 水解用尿素变性的血红蛋白，并释放 Folin Postive 氨基酸和肽，这些氨基酸和肽被确定为酪氨酸等价物。1 个单位在 37°C、pH 7.5 下以变性血红蛋白为底物释放 1 μ 摩尔 Folin 阳性氨基酸。

试剂：

0.05 N HCl - 稀释 0.82 ml 浓 用试剂级水将 HCl 稀释至 200 ml。

0.5 M NaOH - 将 4.0 gm NaOH 溶解在 200 ml 试剂级水中。

缓冲底物 - 将 2.0 gm 血红蛋白溶解在 35 ml 试剂级水中，加入 36.0 gm 尿素和 16 ml 0.5 M NaOH。在室温下搅拌 30 - 60 分钟。加入 0.618 克硼酸并搅拌。用 5 N HCl 将 pH 值调至 7.5，并用 qs 调至 100 ml。

酪氨酸标准品 (2.5 nmol/L) - 将 45.3 mg 酪氨酸溶解在 100 ml 0.05 N HCl 中。

0.3 M 三氯乙酸 - 将 9.8 g 三氯乙酸溶解在 200 ml 试剂级水中。

Folin 试剂 - 将 10 ml Folin-Ciocalteus Phenol Reagent 添加到 20 ml 试剂级水中。

酶：

将 10 mg 冻干材料溶解在 1 ml 试剂级水中。使用前立即用水准备 1:1000 稀释液。

程序：

为空白、标准和测试标记透明玻璃试管。加入 2.5 ml 缓冲底物并在 37°C 下孵育 5 分钟。向标准管中加入 0.2 ml 酪氨酸标准品，在测试中加入 0.2 ml 样品，在空白中加入 0.2 ml 0.05 N HCl，开始反应。在 37°C 下孵育 10 分钟。加入 5.0 ml 三氯乙酸终止反应。混合，然后向空白和标准中加入 0.2 ml 样品，并在测试中加入 0.2 ml 0.05 N HCl。混合并在室温下静置 10 分钟，过滤并用移液管将 1.0 ml 滤液、2.0 ml 0.5 N NaOH 和 0.6 ml Folin 试剂移入试管中。搅拌均匀。静置 15 分钟并读取 A 578 nm。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K相关文献：

1.Bernabeu, C.、Conde, P.、Vasquez, D. 和 Ballesta, J.： 细菌核糖体的肽基转移酶：对蛋白酶 K 的抗性， Eur J Biochem 93、527、1979

2.Betzel, C.、Pal, G.、Struck, M.、Jany, K. 和 Saenger, W.： 蛋白酶 K 的活性位点几何：其与二肽氯甲基酮抑制剂的复合物的晶体学研究 ， FEBS Lett。197 , 105, 1986

3.Brdicka, D. 和 Krebs, W.： 通过蛋白酶定位酶 ， Biochim Biophys Acta 297、203、1972

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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说明书丨Worthington逆转录酶、重组 HIV 检测方案

色谱纯化的异二聚体，由 66kDa 和 51kDa 亚基组成。以 10mM 磷酸钾、pH 7.4、1mM DTT 和 20% 甘油溶液的形式提供。主要用于艾滋病研究目的；该酶在其他应用中的保真度低于 AMV 酶，例如从 mRNA 制备 cDNA 用于克隆目的。

艾美捷Worthington 逆转录酶、重组 HIV化学性质：

单位定义：一个单位在 37°C、pH 8.3 条件下，使用 poly(A)/oligo(dT)12-18 作为模板/引物在 20 分钟内将 1 nmole 氚化 d-TMP 加入酸可沉淀产品中。

注意：目前的检测使用更有效的模板/引物组合，与我们之前的检测相比，比活性增加了大约两倍。因此，Worthington 的包装尺寸包含相同数量的蛋白质，其活性是新测定的两倍。

艾美捷Worthington 逆转录酶、重组 HIV测定：

单元定义：一个单元将 1 纳摩尔氚化 dTMP 加入酸不溶性产物中，使用 poly(A)•oligo(dT) 12-18作为模板引物，在 37°C 下 20 分钟。

试剂：

0.05 M Tris，pH 8.3，含有 0.008 M MgCl 2

1 mg/ml 多聚腺苷酸水溶液（聚 A）

DNA引物：寡核苷酸d(T) 12-18

1 μ 摩尔 dTTP/mL 储备溶液

[甲基- 3 H]-胸苷 5'-三磷酸 ( 3 H-dTTP)

dTTP- 3 H-dTTP 工作混合物：每毫升 100 nmol/mL dTTP 添加 1-2 μL 3 H-dTTP，以获得 1 至 1.5 x 10 5 cpm/mL

1% 牛血清白蛋白

10% 高氯酸

1% 高氯酸

缓冲底物反应混合物：新鲜制备，临用前：

每 1mL 反应混合物所需混合物：

0.7 mL Tris/HCl，pH 8.3，0.008M MgCl 2

0.3 mL 1 mg/mL poly(A) RNA 模板

0.005 mL 0.02 mg /mL oligo d(T) 12-18 DNA 引物

0.02mL 1% BSA

酶：

根据需要用 0.05M Tris/HCl，pH 8.3，0.008M MgCl 2稀释，含有 0.1 mg/mL (1%) BSA

程序：

如下移液器到每个管中：

缓冲底物混合物 0.1 毫升

dTTP- 3 H 3 -dTTP 0.1 毫升

酶 5-10 微升

在 37°C 下孵育 20 分钟。加入 1 ml 10% 冷高氯酸终止反应。通过与 Millipore 真空歧管一起使用的 0.2μ 歧管过滤器进行过滤。使用 2mL 1% 冷高氯酸/洗涤液洗涤四次。将过滤器转移到闪烁瓶中。加入 2mL Cellosolve（或 2-甲氧基乙醇）溶解过滤器。添加 Cellosolve 后过滤器变得不透明。确保过滤器在继续之前溶解。加入 10mL 闪烁鸡尾酒并计数。

艾美捷Worthington 逆转录酶、重组 HIV相关文献：

1.Abbotts, J., and Wilson, S.: Inhibitors of HIV-1 Reverse Transcriptase and Fidelity of in vitro DNA Replication , J Enzym Inhib 6, 35, 1992

2.Abbotts, J., Jaju, M., and Wilson, S.: Thermodynamics of A:G Mismatch Poly(dG) Synthesis by Human Immunodeficiency Virus 1 Reverse Transcriptase , J Biol Chem 266, 3937, 1991

3.Austermann, S., Kruhoffer, M., and Grosse, F.: Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type-1 Reverse Transcriptase by 3'-Blocked Oligonucleotide Primers , Biochem Pharmacol 43, 2581, 1992

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml