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内皮来源的细胞外 microRNA-92a 通过调节血管平滑肌细胞的表型变化促进动脉硬化

上海泉众机电科技有限公司2022年10月18日 8:54 点击:345

动脉硬化被认为是高血压的并发症和各种心血管疾病的合并症。临床上,动脉硬化可以通过测量臂踝脉搏波传导速度(PWV)进行非侵入性评估。功能失调的内皮在血管僵硬的病理学中起主要作用。血管平滑肌细胞(VSMC)的可塑性,其特点是从收缩表型到增殖表型的去分化转变,也有助于动脉硬化。然而,血管内皮细胞(ECs)和 VSMCs 之间的生理通讯是血管稳态的组成部分。


MicroRNAsmiRNA)是小型的非编码RNAs。越来越多的证据表明,细胞外 miRNAs 可以作为心血管疾病诊断、治疗和预后的生物标志物。心血管系统中 miR-92a 水平升高与心血管疾病的病理生理学有关。循环 miR-92a 水平与高血压的临床标志物如24小时动态血压参数、颈动脉内膜-中膜厚度和颈动脉-股动脉 PWV 相关,因此,miR-92a 在高血压的发病机制中具有重要作用。


之前研究表明,增加的 miR-92a 水平通过靶向 Krüppel 样因子2KLF2)、KLF4 和 sirtuin 1SIRT1)等基因导致 EC 功能障碍,这些基因对稳态内皮细胞至关重要。EC miR-92a 可通过细胞外囊泡(EVs)转运至巨噬细胞,以下调 KLF4 水平。然而,尚不清楚高血压发作期间 ECs 中失调的 miR-92a 水平是否会导致动脉硬化,如果是,其潜在机制是否涉及通过 miR-92a 进行 EC-VSMC 通讯。


因此,西安交通大学第一附属医院心血管内科、西北大学生命科学与医学部、美国加州大学医学院心脏病学系的一项联合研究曾探索了 miR-92a 在 EC-VSMC 串扰中的作用及其对动脉硬化的相应影响。结果揭示了人类和小鼠循环的 miR-92a 水平与 PWV 之间的负相关。潜在机制涉及 ECs 中增加的 miR-92a 水平,调节 VSMC 可塑性。锁定核酸-修饰的反义 miR-92aLNA-miR-92a)改善了血管紧张素IIAng II)诱导的小鼠高血压,这表明 miR-92a 拮抗剂在改善动脉硬化方面具有治疗潜力。



高血压患者血清 miR-92a 水平升高


首先,实验设置了高血压患者组和健康对照组。从血液中分离血清并测量 miR-92a的水平。结果表明,与健康对照组相比,高血压患者表现出显著更高的循环 miR-92a 水平(图1 A)。


为了研究 miR-92a 的循环水平是否与动脉硬化相关,实验比较了两组的 PWV,一种评估动脉僵硬度的指标。结果表明,高血压患者的 PWV 高于对照组(图1 B)。高血压患者的血清 NO 水平显著低于对照组(图1 C),但血清内皮素-1ET-1)水平较高(图1 D)。血清 miR-92a 水平与收缩压和舒张压(SBP 和 DBP)、臂踝 PWVbaPWV)和血清 ET-1 水平呈正相关(图1 E-H),但与血清 NO 水平呈负相关(图1 I)。此外,baPWV 与血清 NO 水平呈负相关,但与血清 ET-1 水平呈正相关(图1 JK)。这些结果表明,循环中的 miR-92a 水平提示高血压发作期间的内皮功能障碍和动脉硬化。



1   高血压患者的血清 miR-92a 水平升高。

A)对高血压(HTN)和健康对照组(HC)患者血清miR-92a水平的qPCR分析。(B)患者和对照组的臂踝脉搏波速度(baPWV)。(CD)血清 NO 和 ET-1 水平。(E-I)血清 miR-92a 水平与 baPWVE)、SBPF)、DBPG)、血清 ET-1H)和 NOI)之间的相关性。(JKbaPWV 与血清 NOJ)和 ET-1K)水平的相关性。



Ang II 诱导 miR-92a 和 EC 功能障碍


高血压发作期间升高的 Ang II 水平对心血管系统具有不利作用。因此,实验检查了 ECs 中的 miR-92a 是否可以被 Ang II 诱导。Ang II 处理后以剂量和时间依赖性方式增加 ECs 中 miR-92a 的水平(图2 AB)。对 ECs 稳态至关重要的基因,包括 eNOSKLF2 和 KLF4,都是 miR-92a 的靶点。Ang II 处理降低了 ECs 中 eNOSKLF2 和 KLF4 的 mRNA 和蛋白质水平(图2 CD),但促炎和纤维化 ET-1 的表达增加(图2 CD)。这些结果表明,Ang II 诱导的 EC 功能障碍可能是由升高的 miR-92a 水平介导的。

2   Ang II诱导 miR-92a 和 EC 功能障碍。

A)用不同浓度的Ang II 处理24 hHUVECsmiR-92a水平的miRNA qPCR分析。(B)用Ang II200 nM)处理不同时间HUVECs miR-92a的相对水平。(CD)用Ang II200 nM)或PBSCtrl)处理 HUVECs 24 h,分别用qPCR和蛋白质印迹法测定KLF2KLF4eNOSET-1的蛋白质水平。




miR-92a 调节 VSMCs 的表型变化


因为 VSMCs 的收缩到合成表型变化会导致动脉硬化,因此实验探讨了 ECs 中增加的 miR-92a 水平是否会影响 VSMC 表型。


在与 VSMCs 共培养之前,HUVECs 用 Ang II 或 PBS 处理 24 小时(图3 A)。在用 Ang II 处理的 ECs 和从 Ang II 处理的 ECs 的条件培养基中分离的 EVs 中,miR-92a 的水平升高(图3 BC)。此外,与磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理的 ECs 相比,与 Ang II 处理的 ECs 共培养的 VSMCs 中的 miR-92a 水平升高(图3 D)。


然后测量了与收缩和增殖表型相关基因的 mRNA 水平。在与 Ang II 处理的 ECs 共培养的 VSMCs 中,收缩标志物(α-SMAsmoothelin smoothelin)的 mRNA 水平降低,但增殖标志物(纤连蛋白、骨桥蛋白和血小板反应蛋白)的 mRNA 水平增加(图3 E


鉴于 miR-92a 水平在颈动脉内膜损伤后显著增加,实验分析了来自颈动脉的 RNA-seq 数据(GSE164050)。与上述结果一致,VSMCs 收缩表型的标记基因下调,而增殖表型的标记基因上调(图F)。


接下来研究了由 Ang II 刺激的 EC 衍生的 EVs 是导致 VSMCs 收缩到合成表型变化的原因。在与 VSMCs 共培养的 EC 之前,将 HUVECs 与 Ang II 和 20 μM GW4869 孵育 24 小时以阻断或不阻断 EVs的形成。如图G-IGW4869 处理减轻了 VSMCs 的收缩到合成表型的变化。实验用从 Ang II 处理的 ECs 的条件培养基中分离出来的 EVs 进一步处理 naïve VSMC(图J)。在 EVs 孵育下,ECs 和 VSMCs 中 miR-92a 的水平增加(图KL)。此外,在与 EC 衍生的 EVs 孵育的 VSMCs 中,纤连蛋白、骨桥蛋白和血小板反应蛋白的 mRNA 水平增加,但 α-SMA、 smoothelin calponin的 mRNA 的水平降低(图3 M)。


总的来说,结果表明,Ang II 诱导的 ECs 中的 miR-92a 水平可以通过 EVs 转移到相邻的 VSMCs,这导致 VSMCs 的收缩到合成表型的变化。



3   miR-92a调节VSMCs的表型变化。

A)在静态共培养系统中,在与VSMCs共培养之前,用200 nM Ang IIPBSCtrl)处理HUVECs 24 h。(B-DHUVECsB)、EVsC)和VSMCsD)中 miR-92a水平的qPCR分析。(E)与 Ang II 或 PBS 处理的 HUVECs 共培养的 VSMCs 中收缩基因和增殖基因的相对表达。(F)热图显示根据内膜损伤(N1-4)和对照组(C1-4)颈动脉中的Z评分的差异表达基因的表达。(G–I)与200 nM Ang II孵育24小时后,将20μM GW4869HUVECs共培养24小时。EVsG)和HASMCsH)中的相对 miR-92a水平。指示基因在HASMCs中三组的相对表达(I)。(J)用Ang II PBS处理的HUVECs的条件培养基的EV处理Naïve VSMCs 24小时。(KLHUVECsVSMCsmiR-92a mRNA水平的qPCR分析。(M)用Ang IICtrlEC 衍生EVs 处理的VSMCs中指示基因的相对表达。




LNA-miR-92a 降低高血压易感性


为了进一步阐明 miR-92a 在该小鼠模型中 VSMCs 表型转变中的作用,实验评估了小鼠主动脉中与收缩与增殖表型相关的转录本。与 LNA-Ctrl 给药相比,LNA-miR-92a 给药显著降低了主动脉 ECs 和 SMCs 中 Ang II 升高的 miR-92a 水平。在接受 Ang II 和 LNA-miR-92a 的小鼠的主动脉中,α-SMAsmoothelincalponin 的 mRNA 水平降低,而纤连蛋白、骨桥蛋白和血小板反应蛋白的 mRNA 水平升高。因此,外源性施药 LNA-miR-92a 可有效减轻与 Ang II 诱导的小鼠高血压相关的动脉僵硬度。


为了证明 CD144-EVs 中的 miR-92a 对体内 VSMCs 的表型变化至关重要,实验还从用 Ang II 或盐水处理的小鼠中分离出血清 CD144+ -EVs,然后将这些 EVs 注射到野生型小鼠中。结果表明,从 Ang II 处理的小鼠分离的 CD144+ -EVs的小鼠的血清和 VSMC miR-92a 水平显著增加。一致地,接受这些 CD144+ -EVs的小鼠的 VSMC 收缩标志物显著降低,而增殖标志物增加。


这些数据表明,CD144+ -EVs 与 miR-92a 相关,至少在一定程度上有助于 Ang II 给药小鼠的血管功能障碍和 VSMC 表型转变。


4   EC miR-92aAng II刺激下调节VSMCs可塑性的示意图。

Ang II诱导的EC功能障碍可导致EC-miR-92a通过EVs转移到邻近的VSMCs,以调节VSMCs的收缩至增殖表型变化,从而导致动脉硬化。




动脉硬化被认为是高血压的并发症,由血压升高的长期不良反应以及其他危险因素引起。反过来,血管僵硬是高血压的病理性罪魁祸首。在分子水平上,动脉僵硬受到VSMC张力和EC信号传导的影响,这些信号传导是由衰老、血管生长因子、钙化以及先天性和适应性免疫的激活引起的。在这项研究中,发现功能失调的ECsVSMCs之间的串扰可以促进动脉硬化。具体而言,细胞外miR-92a丰度升高从受损的ECs运输到VSMCs,从而促进血管僵硬。




参考文献:Wang C, Wu H, Xing Y, Ye Y, He F, Yin Q, Li Y, Shang F, Shyy JY, Yuan ZY. Endothelial-derived extracellular microRNA-92a promotes arterial stiffness by regulating phenotype changes of vascular smooth muscle cells. Sci Rep. 2022 Jan 10;12(1):344. doi: 10.1038/s41598-021-04341-1. PMID: 35013491; PMCID: PMC8748448.

原文链接:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35013491/


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