五种线粒体呼吸链复合体活性检测工具

一、线粒体呼吸链简介：

线粒体呼吸链，在生物细胞中，接受代谢物上脱下的氢（或电子）的载体有三种—— NAD+、NADP+和FAD。其中NADPH不进入呼吸链合成ATP，而是作为生物合成的还原剂；只有NADH和FADH2进入呼吸链。

二、线粒体呼吸链传递体顺序

呼吸链中的电子传递有着严格的方向和顺序，即电子从氧化还原电位较低的传递体依次通过氧化还原电位较高的传递体逐步流向氧分子递氢体与电化学梯度的建立。

三、线粒体呼吸链复合体

呼吸作用是生物体内最基础的能量代谢活动之一，是由位于线粒体内膜上的四种呼吸链蛋白复合物分步完成的，这四种蛋白复合物分别为复合物 I（NADH 脱氢酶）、复合物 II（琥珀酸-辅酶 Q 还原酶）、复合物 III（细胞色素 c 还原酶）和复合物 IV（细胞色素 c 氧化酶）。

四、线粒体呼吸链复合体的生物学意义

据统计，约有30-40%线粒体病是由于线粒体呼吸链酶复合体缺陷所致，通常采用线粒体基因组分析与线粒体呼吸链酶活性检测相结合的方式予以确诊。

帕金森病（Parkinson’s disease, PD）、亨廷顿舞蹈病（Huntington's disease，HD）等神经退行性疾病的线粒体功能障碍和能量代谢异常已成为当今共识的早期病理现象, Cardellach研究表明PD患者线粒体复合体I、IV酶活性功能受损； Lambert MP研究证明线粒体机能障碍在HD发病机制中扮演着重要角色，其线粒体复合体II酶活性丢失，铁硫中心和FAD两个亚基表达降低。

线粒体呼吸链复合体I/II/III/IV/V的结构和功能已被广泛研究。目前临床上以营养支持对症治疗复合体缺陷或酶活性异常，从而改善患者症状及延缓病情发展，然而其确切的发病机制和特异性治疗方法仍亟待解决。

五、Abbkine 电子传递链相关研究工具

CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅰ-Ⅴ活性检测试剂盒（比色法）提供了一种更细致准确的复合体Ⅰ-Ⅴ活性检测方法，可以兼容检测多种类型的样本。

1.CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒（比色法）检测原理

基于线粒体呼吸链复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，直接读取340nm下NADH的氧化速率从而计算出该酶活性的大小，操作简单方便，检测更灵敏准确。

2.CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒（比色法）

是复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605 nm有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算复合体Ⅱ的活性。该方法操作简单方便，检测更灵敏准确。

3.CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒（比色法）

是线粒体呼吸链复合体Ⅲ把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C，生成还原型细胞色素C，与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体呼吸链Ⅲ酶活性。该方法操作简单方便，检测更灵敏准确。

4.CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒（比色法）

其检测原理是还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体呼吸链复合体Ⅳ可以催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体呼吸链复合体Ⅳ酶活性。该检测方法操作简单方便，检测更灵敏准确。

5.CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性检测试剂盒（比色法）

是复合体Ⅴ可以水解ATP产生ADP和Pi，然后可以通过测定Pi增加速率来检测线粒体呼吸链复合体Ⅴ的活性。该方法操作简单方便，检测更灵敏准确。

文章来源：线粒体呼吸链复合体及其生物学意义

http://www.abbkine.cn/mitochondrial-complex

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B细胞分泌抗体检测丨分泌抗体B细胞筛选试剂盒

B细胞的分化过程主要可分为前B细胞（Pre-B cell）、不成熟B细胞(immature B cell)、成熟B细胞(mature B cell)、活化B细胞(activated B cell)和浆细胞(plasma cell)五个阶段。

B细胞分化的各个阶段可以通过评估不同的细胞表面标志物的表达和水平来确定，这些标志物的表达和水平在B细胞分化的整个过程中都受到调节。前B细胞胞浆中可检测到IgM的重链u链，但无轻链，也无膜表面Ig的表达，因此缺乏对抗原的反应能力。末端脱氧核甘酸转移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表达在前B细胞，进入非成熟B细胞后这两种标志即消失，因此TdT和CD10对于区分前B细胞与B细胞其它发育阶段非常有用。CD19、CD20和MHCI类抗原在此阶段开始表达。

前B细胞对抗原无应答能力；不成熟B细胞开始表达mIgM，但如与抗原结合，则产生负应答，使B细胞转变为受抑制状态，不能继续分化为成熟的B细胞，这是形成自身免疫耐受的机制之一，CD19、CD20和MHCI类抗原表达量增加，并可开始表达CD21抗原；骨髓中发育成熟B细胞经血液迁移至外周淋巴器官，此时膜表面同时表达mIgM和mIgD，mIgD的表达防止了B细胞与抗原结合后所引起的免疫耐受；成熟B细胞接受抗原刺激后，在抗原提呈细胞和Th细胞的辅助下成为活化B细胞，进而分化为浆细胞，合成和分泌各类免疫球蛋白，同时获得了PC-1等浆细胞特异性标志，而mIg，MHCI类抗原、CD19、CD20、CD21等标记消失。

由此可知，B细胞及其分化亚群可以根据细胞表面表达的不同标志物而区分。选择这些结合了荧光的抗体直接标记这些标志物之后，就可以通过多色流式分析技术实现对抗体分泌B细胞的筛选。

EXBIO分泌抗体B细胞筛选试剂盒，基于不同荧光标记的抗体CD45/IgD/CD27/CD24/CD19/CD21/CD38对EDTA抗凝人血中的抗体分泌B细胞亚群进行免疫表型分析。

结果分析：

需要住院的COVID-19患者中免疫细胞频率动力学的事例。

上图设门分析显示了用于鉴定患者外周全血中抗体分泌细胞（ASC）亚群；下图显示了患者住院期间几个时间点测得的细胞频率（占B细胞的百分比）。

流式细胞术表型鉴定正常人外周血全血中的抗体分泌细胞（ASC）的策略：

1.单重态细胞

2.白细胞

3.单核细胞

4.CD19 + B淋巴细胞

5.CD19 + CD27 +记忆B淋巴细胞

6.CD19 + CD27 + CD38 +抗体分泌细胞

7.IgD +非转换和IgD-级转换的成浆细胞

使用ED7704 抗体分泌B细胞筛选试剂盒在正常人外周血中对循环的抗体分泌细胞（CD19 + CD27 + CD38 +浆母细胞）进行流式细胞仪表面染色。

显示了每个目标人群的频率（B细胞的百分比）。

文章来源：多色流式细胞术如何筛选抗体分泌B细胞

https://www.amyjet.com/featured/dryflowex-asc-screen.shtml