AmyJet活/死细胞双染色试剂盒（绿/红）超全解决方案

背景介绍：

细胞增殖和细胞死亡间平衡的维持对多种细胞有机的发育与生命的维持至关重要，其失衡将导致各 种疾病的发生.如：人类平均每天有 6×10（10）个新细胞生成，同时又接近同等数量的成熟细胞被机体清除.在细胞增殖及细胞凋亡间存在一种配对关系，因此区分活细胞和死细胞对研究生长条件的控制和 细胞死亡过程都是十分重要的。

工作原理：

活/死细胞双染色试剂盒（绿/红），提供了一种方便的测定方法，以评估细胞的活力，它基于使用两种探针同时测定活细胞和死细胞的方法，这些探针测量公认的细胞健康参数：质膜完整性和细胞内酯酶活性。该试剂盒利用可渗透细胞的绿色荧光染料 LiveDye（Ex / Em = 488/530 nm）染色活细胞，并使用不可渗透细胞的红色荧光染料 NucleiDye（Ex / Em = 535/617）用来染死细胞。

活/死细胞双染色试剂盒#AMJ-KT0005：

类型 细胞分析

检测方法 荧光显微镜，流式细胞术；

活细胞绿色荧光染料 LiveDye（Ex / Em = 488/530 nm）死细胞红色荧光染料 NucleiDye（Ex / Em = 535/617）

运输 冰袋运输

保存 请参阅说明书中各个组分的存储条件。

自发货之日起，在推荐温度下至少稳定 12 个月。

其它 默认使用 24 孔板进行实验

* 注意事项

1）为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）NucleiDye 是一个潜在的诱变因子，使用本试剂时应采取适当的防护措施

3）LiveDye 需要在干燥低温避光条件下储存，储存温度为-20℃。

需用户自行准备：

离心机

移液器及吸头

荧光显微镜或流式细胞仪

24 孔板（细胞培养用）

磷酸盐缓冲液 (PBS)

活/死细胞双染色试剂盒（绿/红）特点：

1.针对哺乳动物细胞染色进行优化

2.可用于使用流式细胞术或荧光显微镜，快速定量细胞活力

使用方法：

*[Note] 本实验中选择的细胞为 HeLa 细胞。由于不同类型细胞的最佳染色条件不同，LiveDye和 NucleiDye 的最佳染色浓度会有所不同。

一．试剂准备：

A.活细胞-绿色染料（LiveDye）：冰上避光放置。

B.死细胞-红色染料（NucleiDye）：冰上避光放置。

C.实验缓冲液 (10×) [Assay Buffer(10×)]：用 ddH20 稀释 10x 实验缓冲液，至 1x 实验缓冲液（工作液）。使用前预热到 37C。

D.染色工作液：每 1 ml 的实验缓冲液（1X）中，加入 1ul 活细胞-绿色染料（LiveDye）和 1ul 死细胞-红色染料（NucleiDye），混合均匀（适用于2个样品孔，每孔0.5ml）。如有大量样品，请成比例的扩大染色工作液配置。

二．

（一）荧光显微镜：

1.用预期的方法处理细胞，在不含诱导剂条件下孵育细胞建立阴性对照组；

2.对于贴壁细胞，在 24 孔板的盖玻片上种植和培育细胞，在 CO2 细胞培养箱中 37°C 培养至少 24 小时。先用细胞刮刀或者胰酶-EDTA 消化细胞，之后离心收集细胞（1000 rpm，3 min）。

对于悬浮细胞，直接离心(4℃, 300g, 5 min）收集细胞。

3.用 PBS 洗涤细胞两次，移除液体。

4.在 24 孔板中，每个孔加入 0.5ml 染色工作液来，37℃避光孵育 15-30 min。

5.用 PBS 洗涤细胞两次。

6.将盖玻片覆盖到载玻片上，尽快使用适当的滤光片通过荧光显微镜分析细胞。

*[Note] ：为了获得最佳效果，可以使用抗荧光淬灭剂对其进行观察。

（二）流式细胞分析：

1.用预期的方法处理细胞。

*[Note] ：对于所有的处理和未处理的细胞样本，建议把未染色的对照组细胞悬浮在实验缓冲液（不含有 LiveDye 和 NucleiDye），用于流式细胞分析；

2.对于非贴壁细胞，收集 1-5 ×105 个细胞离心 (4℃, 300g, 5 min)，用预冷的 PBS 洗涤

2 次，弃去 PBS。对于贴壁细胞，先用胰蛋白酶（不含 EDTA）消化细胞，然后离心去上清。

3.用 500ul 染色工作液来悬浮细胞。

4.避光孵育 15-30 min。

5.使用流式细胞仪进行相应检测与分析。

相关研究工具：

货号 名称 规格

AMJ-AB1001 β-actin 单克隆抗体(AJ01) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1002 GAPDH 单克隆抗体(1B4) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1003 β-Tubulin 单克隆抗体(2B5) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1004 植物Actin 单克隆抗体(2G2) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1005 Flag 标签单克隆抗体(2B9) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1006 HA 标签单克隆抗体(3F5) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-AB1007 His 标签单克隆抗体(4C2) 30ul, 100ul, 1ml

AMJ-CH0001 预染蛋白分子量 Marker（10-180 kDa） 100ul, 250ul, 250ul*10

AMJ-CH0002 蛋白酶抑制剂套装（100X） 1ml, 1ml*2, 1ml*5

AMJ-KT0002 WB 超敏ECL 底物试剂盒 50ml, 200ml, 1L

AMJ-KT0006 核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒 50T, 200T

AMJ-KT0007 总蛋白提取试剂盒 50T, 200T

AMJ-KT0008 BCA 蛋白质定量试剂盒（兼容SDS） 500T, 2000T, 5000T

AMJ-KT0009 Bradford 蛋白质定量试剂盒（兼容DTT） 500T, 2000T, 5000T

来源：https://www.amyjet.com/products/AMJ-KT0005.shtml

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PDGF BB丨重组人血小板衍生生长因子-BB使用说明书

【PDGF BB】重组人血小板衍生生长因子-BB具有促有丝分裂、分化、趋化和血管生成的作用。PDGF-BB参与许多病理过程...

PDGF BB 重组人血小板衍生生长因子-BB PDGF BB血小板衍生生长因子

血小板衍生生长因子的应用在美国等发达国家十分广泛，这方面的研究也不断取得进展。基因重组人类血小板衍生生长因子（recombinant human Platelet derived growth factor，rhPDGF）是目前所有众多生长因子中唯一通过美国FDA批准被应用，作为临床处方药的生物工程产品。其应用之一就是以重组人血小板衍生生长因子凝胶剂型的REGRANEX Gel用来作为糖尿病晚期肢端溃疡的清创愈合与修复。另外，血小板衍生生长因子PDGF在重度烧伤、皮肤病患、骨骼与牙齿缺损与再生已经关节修复方面的应用也取得了巨大的进展。

【PDGF BB】重组人血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB, human recombinant）#4488-1000——人PDGF-BB是一种由109个氨基酸残基组成的24.3kdab链同源二聚体蛋白。来源为大肠杆菌中重组表达.

溶解建议：

提供的重组人血小板衍生生长因子-BB 产品为冻干粉末建议将其重新溶解于纯水中至浓度为0.1-1.0 mg/ml，后继实验可根据实验要求使用合适的水溶液进一步稀释.

保存建议：

在您收到艾美捷发出的【PDGF BB】重组人血小板衍生生长因子-BB产品后，建议将其置于-20°C保存.

艾美捷 BioVision的公司总部在美丽的旧金山湾地区，它是生命科学公司的leader.BioVision在开发和研究细胞凋亡检测分析、代谢检测方面具有卓越的影响力.包括检测各种检测分析试剂盒、相关特色抗体、重组蛋白及细胞因子和酶等多种产品，以及其他创新的研究工具.其产品覆盖细胞凋亡研究、能量代谢、细胞/组织蛋白提取、氧化应激与损伤、代谢与肥胖症、细胞增殖与毒性、信号转导、干细胞研究等领域.作为多家知名品牌的中国总代理以及中国区域代理，艾美捷与BioVision一起为研究者们提供超好的细胞生物学研究工具而不断扩大产品及服务质量.

来源：https://www.amyjet.com/products/4488-1000.shtml

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BioVision胞核/胞浆提取试剂盒（#K266-25）背景：

胞核/胞浆提取试剂盒提供一个完全的系统，能从哺乳动物细胞中分离核提取液和胞浆组分.不象其他商业有用的试剂盒，此新试剂盒提供了一个系统，维持核和胞浆组分是分开和完整的.优化的试剂和程序可以快速分离胞核和胞浆片断，而几乎没有交叉污染.

提取的胞核和胞浆蛋白组分是有功能的，适合下游分析如转录活性，RNA拼接，gel-shift分析，报告分析，酶活性分析和WB.

产品描述：

BioVision的胞核/胞浆提取试剂盒提供了一个完整系统将哺乳动物细胞核组分从细胞溶胶中抽提出来.本试剂盒提供了优化的试剂配方和技术手段使抽提过程快速而无交叉污染.抽提出的核和细胞质蛋白组分仍保持其生化功能，可以用于下游的分析操作，比如转录活性、RNA剪切、凝胶迁移检测、报告检测、酶活性分析以及Western blotting等.

产品特点：

1、简易的技术手段，3-4小时即可完成；

2、操作方便快捷；

3、分馏法简单直接.无需超速离心，不接触有毒化合物.

保存建议：请在接收到该Biovision品牌的细胞核/胞浆细胞组分提取试剂盒（25次）产品后，置于-20℃保存.

艾美捷 BioVision的公司总部在美丽的旧金山湾地区，它是全球生命科学公司的领导者.BioVision在开发和研究细胞凋亡检测分析、代谢检测方面具有卓越的影响力.包括检测各种检测分析试剂盒、相关特色抗体、重组蛋白及细胞因子和酶等多种产品，以及其他创新的研究工具.其产品覆盖细胞凋亡研究、能量代谢、细胞/组织蛋白提取、氧化应激与损伤、代谢与肥胖症、细胞增殖与毒性、信号转导、干细胞研究等领域.作为多家知名品牌的中国总代理以及中国区域代理，艾美捷与BioVision一起为研究者们提供超好的细胞生物学研究工具而不断扩大产品及服务质量.

来源：https://www.amyjet.com/products/K266-25.shtml