兼容高通量筛选，无机离子检测丨一氧化氮荧光检测试剂盒

生物体中的无机物主要有水及一些无机离子，如Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、SO42-、等。人体组织中几乎含有自然界存在的各种元素，其中除碳、氢、氧和氮主要以有机化合物形式存在外，其余的统称为无机物（矿物质或灰分）。所以，人体内的无机物主要是由：水和无机盐组成的。无机盐可分为：离子和化合物，离子是维护细胞正常的生命活动，化合物是细胞内化合物的重要组成物分。

无机离子在自然界中起着许多生理作用。阳离子和阴离子参与神经传递、肌肉收缩、细胞内水分运输、血液中的酸碱平衡、骨形成、能量传递和储存。此外，它们作为辅助因子发挥作用，或者可以作为其它重要生物分子中的部分被发现。

艾美捷科技代理的品牌BioVision有一系列丰富的无机离子检测组合，包括钠、钙、磷酸盐和许多其它离子的分析。比如一氧化氮荧光检测试剂盒，主要特点如下：

1.非放射性；

2.特异性、均质分析；

3.方便：较少的样品制备；快速操作protocols（1-2小时）；

4.经济高效：100次分析；兼容高通量筛选；

5.经过验证的：使用哺乳动物组织、生物体液等。

来源：https://www.amyjet.com/featured/nitric-oxide-fluorometric-assay.shtml

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BioVision一氧化氮荧光检测试剂盒重组方案

影响生物水结构和性质的因素 无机离子生命体系中大量存在的无机离子的静电荷，使水分子围绕其周围径向排列，形成有序的离子水化层。

一氧化氮（NO）在神经传递、血管调节、免疫等方面起着重要作用反应与细胞凋亡。由于NO迅速转化为亚硝酸盐（NO2-)以及硝酸盐(NO3)-),亚硝酸盐和硝酸盐的总浓度用作NO的定量测量生产。

艾美捷 BioVision 一氧化氮荧光检测试剂盒可提供准确、可靠的检测结果在一个简单的两步过程中方便地测量总硝酸盐/亚硝酸盐浓度。

在第一步中，硝酸盐通过硝酸还原酶转化为亚硝酸盐。第二步，亚硝酸盐与荧光探针DAN（2，3-二氨基萘）反应。NaOH提高了反应速率荧光产率。荧光强度与总一氧化氮生成量成正比。使用培养基、血浆和组织匀浆对试剂盒进行了测试。

计算方法：

1.绘制标准曲线：绘制荧光与硝酸微微摩尔。

2.测定样品硝酸盐和亚硝酸盐浓度：

图：在硝酸还原酶存在和不存在的情况下进行亚硝酸盐、硝酸盐测定。分析结果如下：根据试剂盒方案，在步骤5将硝酸盐转化为亚硝酸盐1小时。

一氧化氮荧光检测试剂盒重组：

1、分析缓冲液：分析缓冲液可随时使用。在4°C下储存。

2、酶辅因子：与110μl dH2O重组，制成10 mM储备溶液。等分并在-20°C下储存。冷冻/解冻时间应限制为1次。适当稀释部分10X，以制备1 mM工作溶液。使用时请保持在冰上。工作溶液可在4℃下储存6-8小时。

3、增强子：用1.2毫升的分析缓冲液重组。在使用过程中保持冰上状态。储存在-20摄氏度。

4、硝酸还原酶：用1.2毫升分析缓冲液重新组合。等分所需数量并储存在-20°C下。使用过程中请保持在冰上。冷冻/解冻时间应限制为1次。

5、硝酸盐/亚硝酸盐标准品：用1.0 ml分析缓冲液重新配制，旋涡产生每个标准10毫米。不使用时，在4°C下保存（不要冷冻！）。重组的标准品在4°C下储存4个月后稳定。

6、DAN探针和氢氧化钠：随时可用。在4°C下储存。

相关研究工具：

1.一氧化氮比色分析试剂盒

2.谷胱甘肽荧光和比色检测试剂盒

3.乳酸、丙酮酸、NADH/NAD、葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖分析试剂盒。

来源：https://www.amyjet.com/featured/nitric-oxide-fluorometric-assay.shtml

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一氧化氮荧光检测试剂盒：硝酸盐+亚硝酸盐的测量方法

无机离子在自然界中起着许多生理作用。阳离子和阴离子参与神经传递、肌肉收缩、细胞内水分运输、血液中的酸碱平衡、骨形成、能量传递和储存。此外，它们作为辅助因子发挥作用，或者可以作为其它重要生物分子中的部分被发现。

艾美捷 BioVision 一氧化氮荧光检测试剂盒可提供准确、可靠的检测结果在一个简单的两步过程中方便地测量总硝酸盐/亚硝酸盐浓度。

硝酸盐+亚硝酸盐的测量：

1.标准品制备：添加5µl重组10 mM硝酸盐/亚硝酸盐标准品在995µl分析缓冲液中，旋涡产生50µM工作标准溶液。加0,4,，将8、12、16、20µl工作标准加入6个连续井中，生成0、200、400，6008001000pmol/井标准。使用分析缓冲液使体积达到75µl。

注意：DAN探针与亚硝酸盐而非硝酸盐反应。对于常规总亚硝酸盐/硝酸盐测定，只能制备硝酸盐标准曲线。但是，如果需要测量亚硝酸盐和硝酸盐浓度单独使用时，可在标准曲线和分析样品中没有硝酸还原酶。硝酸盐=总量-亚硝酸盐。

2.制备样品：可能需要过滤含有高蛋白浓度的样品在分析前通过10 kDa MW截止过滤器（BioVision Cat#1997-25）。添加0-75µl的向孔中取样，并使用分析缓冲液将体积调节至75µl。

注：典型的尿液亚硝酸盐和硝酸盐水平在0.2-2mm和1-20µM范围内分别地典型正常血清水平分别为0-20µM和0-2µM各种疾病状态显著提高了这些水平。血浆样本或组织应使用不超过10µl的未稀释样品对匀浆进行分析。酚红细胞培养液中的血清可能会降低读数，从而形成标准曲线应使用相同的媒体制作。

3.向所有孔中添加5µl酶辅因子工作溶液。

4.向硝酸盐分析孔（未知和标准）中添加5µl硝酸还原酶，添加5测定时，用µl缓冲液代替硝酸还原酶（未知值和标准值）亚硝酸盐分开。

5.用盖子盖上平板，并在室温（RT）下培养1-4小时。1小时硝酸盐转化为亚硝酸盐的转化率约为90%，2小时转化率约为95%，4小时转化率约为99%转变

6.向每个孔中添加5µl增强剂。孵育30分钟以淬灭干扰化合物。

7.向每个孔中添加5µl DAN试剂。在室温下培养10分钟。

8.向每个孔中添加5µl NaOH。在室温下培养10分钟。

9在荧光计中使用Ex=360 nm和Em=450 nm读取板。

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BioVision钙含量比色检测试剂盒测定方案

钙对于所有生物来说都是必不可少的，因为钙离子在生物体内被吸收并释放到生物体内细胞质外信号是许多细胞过程的信号。99%的钙是钙在骨骼和牙齿中发现，其余1%在血液和软组织中发现。血清钙水平受到严格控制（8.4-11.4 mg/dL），超出此范围的任何变化都可能导致死亡有严重影响。钙在调节血管收缩和舒张中起作用血管、神经冲动传递、肌肉收缩和激素分泌。

钙离子通道控制钙离子在细胞膜上的迁移，允许激活和抑制多种酶。低钙的原因这些水平包括慢性肾功能衰竭、维生素D缺乏和低血镁水平这可能发生在严重的酒精中毒。BioVision的比色钙测定试剂盒利用钙离子与0-甲酚酞形成的显色络合物（λ=575nm），以在生理上重要的钙浓度0.4范围内提供一种简单的测定方法-100毫克/分升（0.1-25毫米）。

艾美捷 BioVision 钙比色法检测试剂盒利用钙离子和O-苯酞酚形成的显色复合物（λ = 575 nm）的原理，使用O-苯酞酚与样本中的钙离子反应后通过比色计或分光光度计实现定量.

钙含量比色检测试剂盒测定方案：

1.标准曲线制备：通过添加10%的钙，将钙标准稀释至5 mM（20 mg/dL）将500 mM标准溶液的µl与990µl dH2O充分混合。将0,2,4,6,8,10µl添加到一系列溶液中每孔提供0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0µg钙。将体积增加到50µl，并使用二氧化二氢。

2.样品制备：血清或尿液样品可直接用于本试验。放置10微升在96孔板中的孔中取样。对于其他液体样品，将2–50µl样品添加到溶液中个人井。用dH2O使总体积达到50µl。样品可以化验没有任何事先治疗。一些MRI造影剂会在这种情况下引起短暂的干扰化验

3.补充：

A） 将90µl显色试剂添加到每个含有标准品、样品或试剂的孔中控制并轻轻混合。

B） 向每个孔中添加60µl钙分析缓冲液并轻轻混合。

4.在室温下培养反应5-10分钟。避光。

5.在575 nm处测量外径。发色团是不稳定的，随着时间的推移会稍微褪色，所以在30分钟内阅读标准品和样品。

6.计算：通过减去从0计算得出的值来校正背景所有样品和标准读数的控制（注：背景读数可能为重要，必须从样本读数中减去）。绘制标准曲线µg/井vs。外径575纳米读数。然后将样本读数应用于标准曲线，以获得井中的钙样本量（Sa）。试样中的钙浓度：C=Sa/Sv（微克/微升或毫克/毫升）式中：Sa是标准曲线中的钙样品量（单位：µg）。Sv是添加到样品孔中的样品体积（µl）。钙分子量：40。样品中的钙浓度可以表示为mg/ml、mg/dL或mM（mmol/升）。1毫克/毫升=100毫克/分升；1毫米=4毫克/分升

图：（a） 标准曲线。（b） 从汇集的人血清（10μl，1:1稀释）和混合人类尿液（10μl，1:1稀释）。试验在试验结束后进行工具包协议。

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镁含量分析丨镁比色检测试剂盒解决方案

按质量计算，镁是人体中含量第十一丰富的元素。Mg+2是对所有活细胞都至关重要，因为它在促进蛋白质的加工方面起着重要作用生物多磷酸盐，如ATP、DNA、RNA和酶的功能。Mg+2是金属离子叶绿素中心的离子，一种常见的肥料添加剂。Mg+2化合物是用作泻药、抗酸剂，用于稳定异常的神经兴奋和血液循环血管痉挛，即子痫。

艾美捷 BioVision镁比色检测试剂盒提供了一种简单灵敏的方法定量检测多种生物样品中的镁.本试剂盒基于甘油激酶对Mg2+需求的特异性.酶联反应的一种产物能显出颜色（λmax = 450nm），该物质的产量与Mg2+浓度成正比.检测范围为2-15 nmoles，检测极限为40 M.

镁比色检测试剂盒分析方案：

1.标准曲线准备：

通过添加10µl 150 nmol/µl镁标准溶液，将标准溶液稀释至1.5 nmol/µl至990µl蒸馏水，充分混合。将0,2,4,6,8,10µl添加到一系列孔中。调整体积为50µl/孔，用蒸馏水生成0,3,6,9,12,15 nmol/孔的镁标准。

2.样品制备：组织或细胞可通过4体积的镁分析提取缓冲液，旋转16000g 10分钟，以获得清晰的提取物。向96孔中添加1-50µl液体样品平板，用水使总体积达到50µl。正常血清含有Mg2+0.7-1.05 mM（1.65-2.55 mg/dL），使用5µl血清进行检测。尿液应稀释10倍。对于未知样品，我们建议测试不同数量的取样以确保OD在线性范围内。

3.镁反应混合物：根据样品数量和标准混合足够的试剂待执行：对于每个孔，制备总含量为50µl的反应混合物，其中包含：35µl镁分析缓冲液10µl显影剂5µl镁酶混合物

4.将50µl反应混合物添加到每个含有镁标准和测试的孔中样品。为了获得最佳结果，使用多通道移液器在所有样品中同时启动反应同时。拌匀。

5.在37℃下培养10分钟。读取铭牌OD450nm，以获得每个标准或标准的A0样品。

注意：

1） 由于酶动力学对温度变化很敏感，因此反应速率将随着温度的升高而增加。反应大约需要10分钟才能达到线性反应速率。

2） 样品中的NAD（P）H等可能会产生背景，10分钟的等待时间可以纠正这些非特异性背景。

3） Mn2+、Zn2+、Ni2+、Fe2+、Cu2+、Co2+、Ca2+不干扰测定。

6.将反应再培养10-30分钟，再次读取OD以获得读数A。建议监测反应动力学，以确保在以下情况下读数在线性范围内：再多读10-30分钟。所有读数不得超过1.5 OD。

7.计算：从标准和样品读数中减去A0得到∆OD=A-A0。情节镁标准曲线。应用样本∆OD到标准曲线，以获得Mg2+量B（nmol）在反应井中。Mg2+浓度：C=B/V（nmol/ml或µM）式中：B为反应井中的Mg2+量（单位：nmol）。V是添加到反应井中的样品体积（ml）。镁分子量：24.3 g/mol，1 mM=2.43 mg/dL。也可以通过监测标准溶液和标准溶液中的反应斜率来计算析样品反应。

镁标准曲线：根据试剂盒方案进行测定。垂直点线表示正常血清Mg2+浓度的下限和上限。

来源：https://www.amyjet.com/featured/nitric-oxide-fluorometric-assay.shtml