“新品尝鲜”：Norgen Biotek低丰度核酸定量试剂盒

从不同的生物或临床样本中可以提取的DNA或RNA数量差异很大。例如，虽然少量的DNA或RNA可以很容易地从过量的组织和细胞中纯化（例如从几毫克的组织中），但许多液体活检样本可能会产生极少量的DNA或RNA。事实上，每100μL的尿液或血浆等样品可能产生1-100 ng或更少的DNA或RNA。测得的浓度最常用的技术是在260 nm（A260）处测定吸光度。然而，即使是新一代的分光光度计，该方法的检出限仍高于2-10 ng/μL。其他技术，例如使用荧光核酸染色剂，已使每μL范围的ng或sub-ng更低的DNA或RNA定量成为可能。但是，这可能无法完全克服从液体活检中定量DNA或RNA的困难，因为预期的DNA或RNA产量可能在每μL范围内较低的pg或sub-pg。

有时候，qPCR实验会成为阻碍你课题顺利开展的强势拦路虎！看似简单的基因表达量差异验证，当遇到低丰富表达的基因时，也许就举步维艰。模板获取困难导致的RNA提取量少或RNA质量不佳，即使选用最佳的试剂、筛选出最良好的引物，也有可能qPCR定量得到的内参基因CT值在18-20个cycle，而目的基因在31-35个循环。遇到这种情况，你是怎么解决的呢？

基因的丰度是指基因在基因组中的绝对拷贝数。可分为高丰度，中等丰度和低丰度。低丰度是指目的基因在基因组中的拷贝数低，可简单认为2ng 总RNA中低于100个拷贝数的基因。从qPCR实验结果来讲，当扩增效率为100%，模板加入量在1-10ng范围内，qPCR得到的CT值高于28时即可认为低丰度基因。 

如何进行低丰度核酸（DNA或RNA）的定量呢？艾美捷科技比较推荐Norgen Biotek的低丰度核酸（DNA和RNA）定量试剂盒：Low Abundance DNA Quantification Kit，NGB-57200；Low Abundance RNA Quantification Kit，NGB-58900

低丰度核酸（DNA和RNA）定量试剂盒特点和优势： 

定量分析各种浓度的DNA或RNA，包括更低浓度范围的ng/µL，pg/µL和sub-pg/µL；

与任何Real-Time PCR系统兼容；

通过使用提供的DNA或RNA标准品构建的标准曲线准确定量DNA或RNA。

【低丰度DNA定量试剂盒（货号57200），厂家测试结果】：

DNA定量的灵敏度：低丰度DNA定量试剂盒与其他方法相比。上图代表不同DNA定量方法的动态范围。该试剂盒可以定量从pg和sub-pg范围内的低丰度样品中纯化的DNA。

使用低丰度DNA定量试剂盒在皮克范围内进行DNA定量的灵敏度。代表性qPCR基线图显示了DNA标准品稀释梯度的扩增。 可以从低丰度样品如液体活检样品（如血浆或尿液）中定量纯化的DNA。使用Norgen的试剂盒可定量至500 fg的DNA。 

【低丰度RNA定量试剂盒（货号58900），厂家测试结果】：

RNA定量的灵敏度：低丰度RNA定量试剂盒（货号58900）与其他方法相比。上图代表不同RNA定量方法的动态范围。该试剂盒可以定量从pg和sub-pg范围内的低丰度样品中纯化的RNA。 

使用低丰度RNA定量试剂盒在皮克范围内进行RNA定量的灵敏度。代表性qPCR基线图显示了RNA标准品稀释梯度的扩增。可以从低丰度样品如液体活检样本（如血浆或尿液）中定量纯化RNA。可以定量低至500 fg的RNA。