AAT内质网钙离子浓度检测荧光探针丨Calbryte-520丨钙离子定量试剂盒

近年来，AAT荧光探针领域陆续出现了很多优质的钙离子探针，这些为实现高通量监测钙浓度，筛选GPCR和钙离子通道药物筛选提供了有力的工具。下面一起来看看几个关于钙离子探针的常见问题吧~希望能给大家带来一些帮助！

一、内质网（ER）钙离子浓度检测荧光探针

内质网是一个复杂的、高度动态的细胞内三维膜系统，在大多数真核细胞中起着动态钙库的作用。内质网Ca2+缓冲液的特殊排列，以对Ca2+的低亲和力为特征，与SERCA泵活性相结合，使内质网Ca2+（[Ca2+]L）保持恒定∼0.1–0.8 mM（细胞钙38:303–310，2005），从而产生针对细胞溶胶的陡峭电化学梯度。内质网Ca2+通道的激活导致Ca2+释放，这有助于[Ca2+]i升高，而SERCA依赖的Ca2+摄取有助于终止胞浆Ca2+信号。

此外，连续的管腔空间可作为游离Ca2+离子（“Ca2+通道”）的行进路线，从而绕过胞浆Ca2+缓冲液，防止线粒体Ca2+摄取或Ca2+在质膜上丢失。

此外，[Ca2+]L的变化调节内质网驻留的伴侣，负责翻译后的蛋白质处理。因此，[Ca2+]L整合了各种信号事件，并在与ER-Ca2+释放/摄取相关的快速信号和主要依赖于蛋白质合成调节的持久适应性反应之间建立了联系。

那么，关于内质网钙离子检测，Cal-520N（Cat# 21146）, Calbryte 520L（Cat# 20640）, Fluo-5N（Cat# 20566）和Mag-fluo4（Cat# 20401)都是可以的。

二、检测细胞中钙离子时加入丙磺舒（probenecid）的作用是什么？文献报导丙磺舒（probenecid）可能会干扰钙离子通道，比如干扰环核苷酸门控通道，有没有可以不用丙磺舒的钙离子探针？

丙磺舒（probenecid），是一种阳离子转运体抑制剂，用来降低探针进入胞内后被排除的几率，以提高胞内信号。常见的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要加丙磺舒，否则信号会很低。可以选择Calbryte系列，该系列无需丙磺舒（probenecid）仍会有很好的信号。

三、荧光探针的AM、盐形式、Dextran葡聚糖形式有什么区别？

AM酯形式：AM酯形式是一种可以透过细胞膜进入细胞的，不需要其他辅助工具；

盐形式：盐形式的Fluo-8不能自行穿过细胞膜，需要辅助进入细胞，如微量注射等；

Dextran葡聚糖形式：若检测孵育时间久容易发生区室化，比如钻进了内质网等亚器官内，Dextran最大的优势就是降低了区室化作用，但是需要显微注射或其他方式才能进入细胞内。

四、样本中钙离子定量检测试剂盒

人体血液里钙离子的浓度大约在19 -10.5 mg/dL范围内，血液里钙离子浓度过低或者过高可引起低钙血症和高钙血症。Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒（Cat#36360）可用于定量体液的钙离子浓度，可使用96孔或者384孔板经酶标仪读取数值， 不需进行样本分离直接检测，30min可完成，最低检测到0.03mM的钙离子。

五、用于植物细胞（拟南芥原生质体）的钙离子探针

常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都适用于植物细胞，Fluo-4最常用，若要获得更好的信噪比，其升级版本 Calbryte 520 AM更合适。

文章来源：https://www.amyjet.com/featured/fluorescent-probe.shtml

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Cell Biolabs小鼠白血病病毒（MuLV）核心抗原ELISA检测

小鼠白血病病毒（MuLV）分为两类: ①急性转化MuLV:Abelson,MuLV为其代表,基因组合有v-abl基因,编码产生p120gag-abl磷蛋白,诱发小鼠B淋巴细胞白血病; ②慢性转化MuLV:极大多数MuLV均属于此类。

最近在人类中发现，异种鼠白血病病毒相关病毒（XMRV）与鼠白血病病毒密切相关（如Gag p30核心抗原有96%的一致性）。

早期的研究将XMRV与前列腺癌和慢性疲劳症联系起来；然而，新的发现对这些说法提出了异议，引发了科学家们新一轮的研究热潮~

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实验原理：将一种抗mulv p30单克隆包衣抗体吸附在微量滴定板上。样品或标准品中存在的mulv核心抗原（p30）与吸附在板上的抗体结合；添加抗mulv p30多克隆抗体并与第一抗体捕获的抗原结合。在孵育和洗涤步骤后，添加一种HRP结合的二级抗体并结合到抗mulv p30多克隆。在洗涤过程中去除未结合的HRP结合的二级抗体，并将与HRP反应的底物溶液加入到空中。有色产物的形成与样品中存在的mulv核心抗原的量成比例。通过添加酸终止反应，并在450 nm处测量吸光度。用重组mulv p30核心抗原制备标准曲线，测定样品浓度。

结果展示：

Fig.1 MuLV Core p30 标准曲线

Fig.2 纯化的重组MuLV p30蛋白

近期发表文章：

Silva, R.J.S. et al. (2020). A Flow-Through Chromatographic Strategy for Hepatitis C Virus-Like Particles Purification. Processes. 8(1):85. doi: 10.3390/pr8010085.

Silva, R.J.S. et al. (2020). Continuous Chromatography Purification of Virus-Based Biopharmaceuticals: A Shortcut Design Method. Methods Mol Biol. 2095:367-384. doi: 10.1007/978-1-0716-0191-4_21.

Renner, T.M. et al. (2018). Full-Length Glycosylated Gag of Murine Leukemia Virus Can Associate with the Viral Envelope as a Type I Integral Membrane Protein. J Virol. 92(6). pii: e01530-17. doi: 10.1128/JVI.01530-17.

Rosales Gerpe, M. C. et al. (2015). N-linked glycosylation protects gammaretroviruses against deamination by APOBEC3 proteins. J Virol. 89:2342-2357.

Aydin, H. et al. (2014).  Crystal structures of beta-and gammaretrovirus fusion proteins reveal a role for electrostatic stapling in viral entry. J Virol. 88:143-153.

Nityanandam, R. & Serra-Moreno, R.  (2014). BCA2/Rabring7 targets HIV-1 Gag for lysosomal degradation in a tetherin-independent manner. PLoS Pathog. 10:e1004151.

Kirchmeier, M. et al. (2014). Enveloped Virus-Like Particle Expression of Human Cytomegalovirus Glycoprotein B Antigen Induces Antibodies with Potent and Broad Neutralizing Activity. Clin. Vaccine Immunol. 21:174-180.

Belanger, K. et al. (2013). Binding of RNA by APOBEC3G Controls Deamination-Independent Restriction of Retroviruses. J. Exp. Biol. 216:2213-2220.

文章来源：https://www.amyjet.com/featured/mlv.shtml

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