Comet Assay Kits 彗星分析试剂盒的功能与作用

Comet Assay Kits 彗星分析试剂盒是什么，有什么作用，一起来分析一下吧！

首先来看看最常用和高通量筛选这两种：

1.Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)（最常用），规格15 assays（5片/25片/5*25片）

2.Comet Assay Kits, 96-Well（96孔玻片）（高通量筛选），规格（1片/5片）

*为方便客户使用试剂盒，艾美捷科技善意将其翻译成中文操作手册，请以试剂盒中配套的英文版为准。因编者翻译水平有限，对于由本说明书中不当翻译所造成的损失，概不负责，如有错误，欢迎指正！

实验开始前，建议先通读说明书（主要以试剂盒中配套的英文版为准）：

背景：由于环境因素和细胞内正常的新陈代谢过程，DNA损伤每天以每个细胞1000到100万个分子损伤的速度发生。虽然这只占人类基因组约60亿个碱基(30亿个碱基对)的一小部分，但关键基因的未修复损伤可能会阻碍细胞发挥其功能的能力，并显著增加癌症的可能性。彗星实验（Comet assay）也被称为单细胞凝胶电泳实验（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一种超灵敏的单细胞水平上检测DNA损伤的技术。在电泳场下，损伤的细胞DNA(包含碎片和链断裂)从完整的DNA中分离出来，在显微镜下形成典型的“彗星尾巴”形状。DNA损伤的程度通常是通过测量彗星尾巴来目测的，也可以使用图像分析软件来测量各种参数。

OxiSelect™ Comet Assay是一种快速、灵敏的，用于测量细胞DNA损伤的试剂盒。每个试剂盒提供足够的试剂，最多可进行15次检测。

实验原理：Cell Biolabs 的 OxiSelect™ Comet Assay 是一种单细胞凝胶电泳法 (SCGE)，用于简单评估细胞 DNA 损伤。首先，将单个细胞与低熔点琼脂混合后，再应用到OxiSelect™ Comet特制玻片上。然后，用裂解缓冲液和碱性溶液处理这些嵌入的细胞，使DNA松弛并变性。最后，在电泳槽中对进行电泳，以分离完整的DNA和受损的片段。电泳后，样品被干燥，用DNA染料染色，并通过外显荧光显微镜可视化。在这些条件下，受损的DNA（包含裂解和链断裂）将比完整的DNA迁移更多，并产生 "彗星尾 "形状（见下图）。

彗星实验原理与流程示意图

自备材料：

1.氯化钠粉末

2.NaOH颗粒

3.10 N NaOH，用于调整pH值 （10 N NaOH = 10 M NaOH =10 mol/L NaOH）

4.DMSO（可选）

5.70%乙醇

6.TE缓冲液（10mM Tris，pH 7.5，1mM EDTA）。

7.PBS（不含Mg2+和Ca2+）。

8.EDTA(二钠盐)

9.DI H2O（去离子水）

10.37ºC和沸水浴

11.水平电泳槽

12.可调节的单通道微量移液器，带一次性吸头。

13.带FITC过滤器的外显荧光显微镜

保存条件：收到试剂盒后，将绿色荧光DNA染料，10000X存放在-20ºC。 所有其他试剂盒组件在室温下储存。

关于实验步骤，因为篇幅有限，大家感兴趣的可以搜一下原文，也可以留言哦~

文章来源：

https://www.amyjet.com/featured/comet-assay-kits.shtml

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