抗坏血酸（AsA）含量测试盒操作步骤

抗坏血酸（AsA）含量测试盒操作步骤：

1、贴壁细胞的消化

①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。

③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变

化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。000～2000g 离心 min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

测定意义:

MDHAR是植物抗氧化系统之一 AsA 代谢的重要成员，催化MDHA还原生成AsA。

测定原理：

MDHAR催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA；通过测定每分钟氧化NADH的量，可计算出MDHAR活力。

实验中所需仪器及设备：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、ml石英比色皿、可调式移液枪、双蒸水