高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明书

 高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明书

货号：BL1356

规格：100ml

      本产品配有一支PMSF（1.5ml）

保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20℃保存。

使用说明：

如发现RIPA有沉淀，请常温放置半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1mlRIPA加入10μlPMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。

1、样品前处理：

a）对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b）对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c）对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量）。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事项：

    本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量SDS(1%)，煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

    如果需要检测盒基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。