你不知道的DNA探针（二）

上期百萤生物带您了解了四种市场常见的荧光探针，本期我们将给您介绍其他几种市场常见的DNA探针，希望对您的实验有所帮助。

DAPI（4'，6-二脒基-2-苯基吲哚）（Key：蓝色荧光、AT序列偏好、荧光显微镜、微渗透、细胞毒性、无毒）

DAPI，与此列表中的许多染料一样，最初合成为医学剂。它最初用于治疗锥虫病，这是一种由寄生虫引起的疾病。在20世纪70年代后期，DAPI被用作DNA探针，因为它具有结合DNA的功效和结合后荧光的大量增加。DAPI特别强烈地结合双链DNA的富含AT的区域，并且在结合时将经历大约20倍的荧光增加。它也可以与RNA结合，但荧光增加较弱，发射红移。DAPI通常用于荧光显微镜。它特别成功地染色死细胞或具有受损膜的细胞。DAPI可以通过完整的细胞膜，但是比较困难。因此，不推荐用于活细胞染色。DAPI的激发波长为358nm，发射波长为461nm。这意味着当使用蓝色/青色滤镜进行可视化时，它将显示为蓝色。它也可以与绿色荧光探针如GFP一起使用。

在实验中，DAPI具有高细胞毒性，这是不可使用DAPI进行活细胞染色的另一原因。DAPI对人类是无毒的。然而，与许多DNA探针一样，DAPI可能具有一些诱变特性。该试剂百萤生物有售，见货号Cat#17509。

7-AAD（7-氨基放线菌素D）（Key:GC序列偏好、红色荧光、543nm氦 - 氖激光、死细胞、不可渗透、荧光显微镜、流式细胞术）

7-AAD是荧光探针和嵌入剂。与DAPI一样，它对结合双链DNA具有很强的亲和力。与富含AT的区域结合的DAPI不同，7-AAD选择性地结合富含GC的区域。它也会与RNA结合，因此在染色前可能需要消化酶。7-AAD的激发波长为546nm，发射波长为647nm。由于斯托克斯大转变，许多研究人员使用7-AAD与蓝色和绿色荧光探针结合进行多色分析。7-AAD受到543 nm氦氖激光器的激发。

7-AAD适用于检测死细胞群或具有受损膜的细胞。它不容易通过完整的膜，是它不能成为活细胞染料的重要原因。7-AAD已在荧光显微镜和流式细胞术中得到广泛应用。该试剂百萤生物有售，见货号Cat#17501。

Hoechst 33258（33342,34580）（Key:蓝色荧光、活细胞、膜可渗透、低细胞毒性、AT序列偏好、氙汞灯、紫外激光、荧光显微镜、流式细胞仪）

Hoechst染色是一组蓝色荧光DNA探针。早在20世纪70年代，它们就被用于染色DNA。这些染料由德国公司Hoechst AG开发，是传统蓝色荧光染料的良好替代品。Hoechst染料比类似染料如DAPI具有更高的细胞渗透性。这意味着Hoechst染色剂，如Hoechst 33258，适用于染色活细胞和死细胞。此外，由于Hoechst染料的细胞毒性较低，对活细胞群的影响大大降低。Hoechst染色将选择性地结合富含AT的双链DNA区域，特别是与小沟结合。在与DNA结合后，Hoechst染色将经历大约30倍的荧光增加。Hoechst染色可以被紫外线（~360nm）激发并发出蓝色荧光（~460nm）。这些染料与氙汞灯以及紫外激光器兼容。它们非常适用于荧光显微镜，免疫组织化学和流式细胞术。

Hoechst 33258,33342和34580之间的区别很重要。与Hoechst 33258相比，Hoechst 33342由于添加了亲脂性乙基而具有显着更高的渗透性。对于Hoechst 34580，发射最大值略微蓝移，与Hoechst 33258和Hoechst 33342的461 nm发射最大值相比，驻留在437 nm处。该试剂百萤生物有售，见货号Cat#17523。

PicoGreen?/ Helixyte?（Key:高成本，极其敏感，绿色荧光，PCR，酶标仪，dsDNA）

PicoGreen（及其化学等效的Helixyte）是一种极其敏感的双链DNA探针。它可用于生物化学应用，例如酶标仪中dsDNA的定量。它可以检测低至25 ng / mL的dsDNA。这使得它比Hoechst探针更敏感。除了灵敏度之外，PicoGreen还是一种非常有选择性的探针。它对单链DNA，RNA和游离核苷酸的dsDNA具有高亲和力。

顾名思义，PicoGreen在与DNA结合时会发出绿色荧光。它的荧光也会增加大约1000倍。这意味着它将具有非常好的信噪比。它可用于各种应用，例如PCR和微阵列分析。它是DAPI和Hoechst的良好替代品。特别是，当DNA样品数量有限时，由于其对传统污渍的敏感性和选择性更高，因此非常适用。然而，这些优势是有代价的。探针本身比传统探针更昂贵，每毫升花费几百美元。该试剂百萤生物有售，见货号Cat#17597。

YOYO?-1 / DiYO?-1 /TOTO?-1 / DiTO?-1（Key:极其敏感、高成本、不渗透、流式细胞仪、细胞活力、花菁、绿色荧光）

这些是基于化合物恶唑黄的菁染料家族。尽管如此，这些染料实际上发出的是绿色荧光而不是黄色荧光。例如，YOYO-1（及其化学当量，DiYO-1）的最大发射为509nm。TOTO-1（及其化学当量，DiTO-1）也是如此; 该化合物的最大发射为535nm。这些化合物是嵌入剂，意味着它们将自身插入DNA碱基对的平面表面之间。该DNA探针家族因其对DNA的高亲和力而被人们所知晓。在与DNA结合后，这些探针可以经历荧光增加一千至三千倍。这种对DNA的强烈亲和力使它们非常适合需要极高灵敏度的实验。然而，这些探针相当昂贵。一毫升可能花费几千美元。

因为这些探针是细胞不可渗透的，所以它们不能通过完整的细胞膜。它们非常适合染色固定或死细胞。在这方面，这些探针通常与诸如流式细胞术的平台一起用于细胞活力和细胞毒性测定。该试剂百萤生物有售，见货号Cat#17580。

SYBR?（Key:绿色荧光，qPCR，凝胶电泳，高成本，花青）

SYBR是另一类基于花青的染料，用于染色DNA和RNA。该染料家族对双链DNA具有高选择性，对单链DNA和RNA的选择性较低。SYBR染料主要是绿色荧光探针（SYBR Green I和SYBR Green II），也可选择黄色荧光（SYBR Gold）。

SYBR染料已被发现用于量化DNA。例如，SYBR染料可用于监测定量实时PRC（qPCR）。SYBR染料也已用于凝胶电泳。特别是，SYBR染料作为常用的溴化乙锭的更安全的替代品已被出售。然而，关于SYBR染料是否确实比溴化乙锭更不危险的证据是混合的，因为它们都是潜在的诱变剂，源于它们插入DNA的能力。在定价方面，SYBR染料比溴化乙锭贵得多，每毫升约500美元。该试剂百萤生物有它的同等替代品，见货号Cat#17592。

百萤生物，是美国AAT Bioquest 的中国代理商，原装进口的产品，给您最佳的科研体验。以上是本期介绍的所有DNA探针，希望大家根据自己的实际情况选择适合自己试验的试剂，达到完美的实验效果。