Exosome研究专题Exosome Research
- 上海前尘生物科技有限公司2015年8月19日 16:55 点击：5350
关键词：SBI，Exosome，囊泡，膜性小囊泡，Exosome抽提，Exosome免疫纯化，Exosome抗体，Exosome RNA
Exosome研究专题Exosome Research
Exosome是由多种活细胞分泌的50-100nm的膜性小囊泡，来源于晚期核内体（也成为多囊泡体）的囊泡，是由细胞内多泡体（MVBs）出芽形成，再与细胞膜融合后释放到细胞外基质中。几乎所有类型的细胞都能分泌，广泛存在于各种体液中。不同细胞来源的Exosome所含有的具体成分不尽相同，根据分泌的细胞类型不同，在血液、尿液、羊水、恶性肿瘤、腹水等动物体液中的Exosome通常含有特定的miRNA和蛋白质，因此，Exosome为研究潜在的各种biomarker提供了很好的生物学材料。
Exosome参与调控重要的细胞生理活动，在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程中的作用均有报道，可以成为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。作为囊泡的一种，Exosome受到越来越多的关注。2013年诺贝尔奖揭晓，美国、德国3位科学家James E. Rothman, Randy W. Schekman和Thomas C. Sudhof因“发现细胞内的主要运输系统-囊泡运输的调节机制”，荣获2013年诺贝尔生理学或医学奖。这一奖项的授予，无疑将囊泡的研究推向了新的高潮。
一、Exosome抽提
SBI公司研究和开发了一款基于多聚体形式的Exosome提取试剂，能够快速有效地提取及分离血清和肿瘤组织样本中的Exosome囊泡。这些多聚体能够形成类似于网状结构，从而将60-180nm直径的微泡分离出来。其纯度和产量皆优于上述传统方法。
（一）基于血清和血浆样本
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货号 |
产品 |
规格 |
价格（元） |
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EXOQ5A-1 |
ExoQuickexosome precipitation solution |
5ml(75T) |
4203.2 |
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EXOQ20A-1 |
ExoQuickexosome precipitation solution |
20ml(300T) |
13561 |
产品特点
Ø 无需费时费力地超速离心；
Ø 比起昂贵的磁珠抗体或色谱柱更便宜；
Ø 适用于任何种属来源的生物液体；
Ø 保持 exosome完好的生物活性；
Ø 富集更多的exosome；
Ø 省时，只需一个小时完成；
Ø 最少可从100μL的血清或5ml细胞培养上清/尿液中分离
产品操作步骤（仅作参考，以说明书为准）
1. 收集生物液体，并于3000g离心15分钟去除细胞或细胞碎片；
2. 将上清转移至另一干净的灭菌管中，加入适量的ExoQuick试剂（体积配比见下表）；
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孵育时间 |
样本 |
样本体积 |
ExoQuick体积 |
|
30分钟 |
血清 |
63ul |
|
|
4℃过夜（12小时） |
生物液体 |
250ul |
63ul |
3. 上下颠倒离心管，混匀；
注意：如果是血浆样本，可能会因为纤维蛋白或者其他纤维蛋白原，造成沉淀。对于血浆样本，请参考：
Pacific Hemostasis™ Thromboplatin D (Thermo Cat#10-0356)
1） 使用1/2体积的凝血活素D与血浆样本充分混匀；
2） 37℃孵育15min；
3） 10,000rpm室温离心5min；
4） 保存上清，即“血清样”液体，去除沉淀；
5） 按照100ul上清：25ul ExoQuick试剂的比例混匀。
以下步骤相同。
4. 4℃孵育过夜（至少12小时）或者30min（血清样本）；
5. 室温或4℃ 1500g离心30min，管底可见沉淀；
6. 去除上清；
7. 1500g继续离心5min，小心去除上层的液体组分；
8. 加入1/10原始体积的无菌水或无核酸酶水，重悬沉淀。若沉淀难以溶解，可酌量加上直至完全溶解。
（二）基于细胞培养上清、组织、尿液样本
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货号 |
产品 |
规格 |
价格（元） |
|
ExoQuick TC exosome precipitation solution |
4189 |
||
|
EXOTC50A-1 |
ExoQuick TC exosome precipitation solution |
50ml(50T) |
14072 |
注：常温或蓝冰运输。
产品操作步骤（仅作参考，以说明书为准）
1.收集生物液体，并于3000g离心15分钟去除细胞或细胞碎片；
2.将上清转移至另一干净的灭菌管中，加入适量的ExoQuick TC试剂（体积配比见下表）；
|
孵育时间 |
样本 |
样本体积 |
|
|
过夜（12小时） |
尿液 |
5ml |
1ml |
|
4℃过夜（12小时） |
细胞培养上清 |
5ml |
1ml |
3.上下颠倒离心管，混匀；
4.4℃孵育过夜（至少12小时）；
5.室温或4℃ 1500g离心30min，管底可见沉淀；
6.去除上清；
7.1500g继续离心5min，小心去除上层的液体组分；
8.用100-500ul buffer重悬沉淀（所用buffer根据下游的蛋白分析或RNA分析来定）。
（三）Exosome抽提辅助试剂
1.ExoQuick-LP脂蛋白预处理试剂盒
人类血浆包含着一些微球、外泌体、凋亡小体和脂蛋白颗粒的混合物，为了研究血清或血浆中的exosome所包含的miRNA和蛋白，必须在提取exosome之前尽量去除其它一些颗粒，特别是脂蛋白颗粒。最新的研究表明，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中均包含有miRNA。为了避免在对exosome中miRNA研究中引起假阳性结果，必须尽量去除血清或血浆中的脂蛋白。SBI为您提供ExoQuick-LP试剂盒，有效去除样本中的脂蛋白，并高效提取血清或血浆中的Exosome。
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货号 |
产品 |
规格 |
价格（元） |
|
EXOLP5A-1 |
ExoQuick-LP Lipoprotein PreClear&Exosome Precipitation Kit |
10T |
5751 |
运输和保存
ExoQuick-LP试剂盒由蓝冰或常温运输，收到产品后保存在4℃。
2.凝血酶素D试剂
为了避免血浆中的纤维蛋白造成exosome提取过程中的沉淀，因此要用凝血酶素D试剂预先去除血浆中的纤维蛋白，从而便于exosome的提取与研究。
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货号 |
规格 |
价格（元） |
|
|
TMEXO-1 |
Thrombin Plasma prep for Exosome Precipitation |
100T |
6347.4 |
|
EXOQ5TM-1 |
ExoQuick Plasma prep and Exosome Precipitation Kit |
75T |
9471.4 |
运输与保存
TMEXO-1试剂盒由蓝冰或常温运输，收到产品后保存在4℃。
二、Exosome免疫纯化与分选
（一）FACS磁珠分选Exosomes
由于Exosomes体积太小而无法直接用于流式细胞分析，SBI为您推荐Exo-Flow抗体磁珠试剂盒，该试剂盒能够捕获Exosome特定的表面标记蛋白，利用流式分选技术，从而分离出不同亚型的Exosome。
试剂盒中提供的9.1μM直径的Exo-Flow磁珠与传统的4μM Dynabeads磁珠相比，能够更好地捕获Exosome，特别适用于数量较少的Exosome样本。
常见的Exosome表面marker
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Marker Type |
Functions |
Examples |
|
Tetraspanins |
Exosome formation and secretion |
CD9, CD63, CD81 |
|
Targeting/Adhesion |
Exosome maturation and target cell binding |
Integrins, ICAM-1, CD31, CD44 |
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Antigen Presentation |
Immune modulation, anergy and priming |
MHC I/II, HLA-G |
|
Membrane transport and fusion |
Exosome biogenesis, secretion and downstream cell fusion |
SNAP, Annexins, Rab5b |
产品特点
Ø 表面积大，磁珠捕获能力增强；
Ø 选择性捕获和纯化Exosome；
Ø 多种标记抗体供选择；
Ø FITC标记的流式应用；
Ø 可自由配备标记抗体。
试剂盒组分（10次反应）
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200 mL at 10 mg/mL |
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Biotinylated capture antibody, 100 ng/mL in PBS (multiple varieties) |
100 mL |
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Bead Wash buffer |
60 mL |
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Exosome Stain Buffer |
3 mL |
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Exo-FITC Universal exosome stain |
100 mL |
|
Exosome Elution Buffer |
3 mL |
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Magnetic stand (optional, cat# EXOFLOW700A-1) |
1 Stand |
产品信息
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货号 |
名称 |
规格 |
价格（元） |
|
EXOFLOW100A-1 |
CD9 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD9-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW150A-1 |
TetraspaninExo-Flow combo capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD9, CD63, and CD81-biotin capture antibodies, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
8718.8 |
|
EXOFLOW200A-1 |
CD31 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD31-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW210A-1 |
CD44 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD44-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW300A-1 |
CD63 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD63-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW400A-1 |
CD81 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD81-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW500A-1 |
Rab5b Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, Rab5b-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW600A-1 |
HLA-G Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, HLA-G-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW610A-1 |
CD14 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD14-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW620A-1 |
CD68 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD68-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW630A-1 |
EpCAMExo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, EpCAM-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW650A-1 |
Alpha-2-Macroglobulin (A2M) Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, A2M-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
10 reactions |
5736.8 |
|
EXOFLOW700A-1 |
Exo-Flow Multifunctional Magnetic Stand |
1 Kit |
3947.6 |
|
EXOFLOW800A-1 |
Exo-FITC Exosome FACS stain |
20 reactions |
2158.4 |
|
EXOFLOW810A-1 |
Exo-APC Exosome FACS stain |
20 reactions |
2158.4 |
|
CSFLOWBASICA-1 |
Basic Exo-Flow kit without any coupled antibodies (Uncoupled magnetic streptavidin beads, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) |
100 reactions |
9869 |
（二）IP高通量沉淀血清Exosomes
Exo-Flow 96/32 IP试剂盒可从血浆样本、使用ExoQuick-TC或超速离心富集的细胞培养上清（尿液、脑脊髓液等）exosomes产物样本中高通量、直接免疫沉淀exosomes。
试剂盒中的磁珠已经预结合了CD9、CD63或者CD81用于选择性捕获特定的exosomes亚型，直接将上述样本添加入磁珠中即可免疫沉淀exosomes。96孔板或32孔板形式产品可用于同时处理多个样本。得到exosomes具有完整形态，可用于下游exosomes RNA和蛋白分析。
三、Exosome验证分析
SBI ExoELISA产品线提供exosome常见的标记蛋白CD63、CD9、CD81和Hsp70抗体，这4种抗体也可以以试剂盒的形式提供（Western blot sampler kit (Catalog# EXOAB-KIT-1)）和ELISA试剂盒。
（一）Exosome抗体（Western Blot分析）
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格（元） |
|
EXOAB-CD63A-1 |
Anti-CD63 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat, horse) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-CD81A-1 |
Anti-CD81 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-CD9A-1 |
Anti-CD9 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-Hsp70A-1 |
Anti-Hsp70 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-CETP-1 |
Anti-CETP Antibody (polyclonal rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-KIT-1 |
ExoAb Antibody Kit (CD9, CD63, CD81, Hsp70 antibodies, rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul each |
6475.2 |
|
EXOAB-FLOT1-1 |
Anti-FLOT1 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-EPCAM1-1 |
Anti-EpCam Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-TSG101-1 |
Anti-TSG101 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-CXCR4-1 |
Anti-CXCR4 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-VMTN-1 |
Anti-Vimentin Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-ALIX-1 |
Anti-ALIX Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
|
EXOAB-ANXA5-1 |
Anti-ANXA5 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody |
25 ul |
1902.8 |
Exosome抗体运输与保存：蓝冰运输，收到产品后4℃保存，长期保存可置于-20℃.收到产品后有效期为6个月以上。
（二）ELISA定量分析
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格（元） |
|
EXOEL-CD63A-1 |
Exosome ELISA Complete Kit (CD63 detection) |
96 reactions |
8378 |
|
EXOEL-CD81A-1 |
Exosome ELISA Complete Kit (CD81 detection) |
96 reactions |
8378 |
|
EXOEL-CD9A-1 |
Exosome ELISA Complete Kit (CD9 detection) |
96 reactions |
8378 |
|
EXOCET96A-1 |
EXOCET Exosome Quantitation Kit |
96 reactions |
5609 |
|
EXOAB-POS-1 |
Human Exosome lysate positive protein control (10ug/ul) |
50 ul |
3436.4 |
|
EXOEL-BB-20 |
Exosome binding buffer for ELISAs |
20 ml |
1902.8 |
产品特点
Ø 3种Exosome表面特殊蛋白检测试剂盒供选择：CD63，CD9，CD81；
Ø 间接ELISA法，信号经过两步放大，灵敏度大大提高；
Ø 适用于所有类型细胞分泌的Exosome；
Ø 可检测任何分离方法得到的Exosome。
运输与保存：试剂盒由蓝冰运输，4℃保存，其中，ExoELISA蛋白标准品需保存在-20℃，建议蛋白样本分装，以避免反复冻融。有效期为收到产品后6个月。
四、Exosome功能研究
（一）荧光标记Exosome
SBI新产品Exo-Glow试剂盒，能够荧光标记内源的Exosome RNAs为红色，标记内部Exosome蛋白为绿色，从而达到使用荧光显微镜实时追踪Exosome细胞内相互作用和物质运输。
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
|
EXOR100A-1 |
Exo-Red exosome RNA fluorescent label |
20 rxns |
4047 |
|
EXOG200A-1 |
Exo-Green exosome protein fluorescent label |
20 rxns |
4047 |
|
EXOC300A-1 |
Exo-Red + Exo-Green exosome cargo fluorescent label Combo Pack (10 rxns of each label) |
20 rxns |
4615 |
（二）利用Cyto-Trace让细胞分泌带有荧光的Exosome
四次跨膜蛋白CD9、CD63和CD81蛋白为Exosomes常见的生物标记蛋白。通过CD63和CD9 Cyto-Trace质粒，可以让您研究的靶细胞分泌带有绿色或者红色荧光的Exosomes，以便下游功能性运输研究。
|
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
|
CYTO120-PA-1 |
pCT-CD63-GFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD63 Tetraspanin Tag) |
10ug |
7540.2 |
|
CYTO120R-PA-1 |
pCT-CD63-RFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD63 Tetraspanin Tag) |
10 ug |
7540.2 |
|
CYTO122-PA-1 |
pCT-CD9-GFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD9 Tetraspanin Tag) |
10 ug |
7540.2 |
|
CYTO123-PA-1 |
pCT-CD9-RFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD9 Tetraspanin Tag) |
10 ug |
7540.2 |
|
CYTO124-PA-1 |
pCT-CD81-GFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD81 Tetraspanin Tag) |
10 ug |
7540.2 |
|
CYTO125-PA-1 |
pCT-CD81-RFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD81 Tetraspanin Tag) |
10 ug |
7540.2 |
（三）Exosome转染试剂
新型核酸转染试剂Exo-Fect，可以将核酸直接转染至分离得到的Exosome中。转染的si/miRNA，mRNA，甚至质粒DNA，可以通过转染的Exosome进入靶细胞。
只需要将目的核酸与Exo-Fect转染试剂、分离到的Exosome简单混合，就能形成Exosome核酸运载复合体。整个转染过程检测，不到1小时即可完成核酸高效转染入Exosome过程。
|
货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
|
EXFT10A-1 |
Exo-FectExosome Transfection Kit |
10 reactions |
2769 |
|
EXFT20A-1 |
Exo-FectExosome Transfection Kit |
20 reactions |
4970 |
五、Exosome RNA全面研究
Exosome RNA提取试剂盒专为exosome RNA抽提设计，完美的富集microRNA和其他小片段RNA。分别针对血液样本和体液样本设计两款RNA提取试剂盒，特异性更高，适用所有类型细胞分泌的，以及任何分离方法得到的exosome RNA提取。操作简单、方便，1h完成血清exosome RNA提取，无需苯酚/氯仿抽提。
纯化的exosome RNA可以做进一步的microRNA筛选、芯片或二代测序等下游分析。但是由于exosome RNA含量总体水平偏低，因此需在进行下游分析之前进行exosome RNA的预扩增。
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
|
|
RA800A-1 |
Complete SeraMirExosome RNA Amplification kit (5ml ExoQuick, 20 exoRNA columns, cDNA synthesis and amplification components) |
20 reactions |
10280.8 |
|
|
RA800TC-1 |
Complete SeraMirExosome RNA Amplification kit from Media and Urine (10ml ExoQuick-TC, 10 exoRNA columns, cDNA synthesis and amplification components) |
10 preps |
7227.8 |
|
|
RA806TC-1 |
SeraMirExosome RNA Purification only kit for Media and Urine (10ml ExoQuick-TC and 10 exoRNA columns) |
10 preps |
6006.6 |
|
|
RA808A-1 |
SeraMirExosome RNA Purification Column kit (20 exoRNA columns) |
20 preps |
4189 |
|
|
RA810A-1 |
Human SeraMirExosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set |
20 profiles |
14824.8 |
|
|
RA820A-1 |
Human Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit (contains cat# RA800A-1, RA805A-1, RA810A-1 components) |
20 profiles |
14824.8 |
|
|
RA820TC-1 |
Human Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit for Media and Urine (contains cat# RA800TC-1 with 50ml ExoQuick-TC, RA805A-1 and RA810A-1 components) |
20 profiles |
18644.6 |
|
|
RA811A-1 |
Mouse SeraMirExosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set |
20 profiles |
5708.4 |
|
|
RA821A-1 |
Mouse Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit (contains cat# RA800A-1, RA805A-1, RA811A-1 components) |
20 profiles |
14824.8 |
|
|
RA821TC-1 |
Mouse Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit for Media and Urine (contains cat# RA800TC-1 with 50ml ExoQuick-TC, RA805A-1 and RA811A-1 components) |
20 profiles |
18644.6 |
|
|
RA812A-1 |
Rat SeraMirExosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set |
20 profiles |
5708.4 |
|
|
RA822A-1 |
Rat Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit (contains cat# RA800A-1, RA805A-1, RA812A-1 components) |
20 profiles |
14824.8 |
|
|
RA822TC-1 |
Rat Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit for Media and Urine (contains cat# RA800A-1, RA805A-1, RA812A-1 and EXOTC50A-1 components) 20 profiles |
20 profiles |
18644.6 |
|
|
RA805A-1 |
SeraMir Control spike-in Small RNA and qPCR assay |
100 assays |
2215.2 |
|
|
RA800P-3 |
SeraMir 3’-Universal Primer bonus pack (for an additional 10,000 qPCR reactions) |
1.2 ml |
1533.6 |
|
品牌介绍
美国SBI（System biosciences）公司由前Clontech公司的创始人Dr. Ken Fong所创立。SBI一直致力为生命科学前沿领域提供各种最新的研究工具和产品。System Biosciences (SBI) 致力于开发独特、革新的技术，为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具。SBI又称为“慢病毒公司”，提供各种基于慢病毒的所有产品，包括慢病毒的包装系统，病毒浓缩液，shRNA和microRNA功能研究的慢病毒载体，文库和高滴度的病毒，同时还提供各种基于慢病毒的延伸产品，在干细胞研究领域提供诸如iPS细胞，高效的iPS诱导系统还有检测iPS细胞分化的实时监测系统。SBI同时秉承Clontech在分子克隆领域的成功经验，推出了一系列的高效克隆工具，如革命性的高效无酶连接系统（Cold-fusion Kit），真正做到了5min连接外源基因到载体。
同时SBI还是一家在全球范围内很有名的服务公司，曾为多家知名企业和科研院所提供各种病毒构建，和干细胞服务等。
上海前尘生物科技有限公司www.qcbio.com 4006-111-883
联系邮箱：kefu@labbase.net
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