如何精确的检测ROS对细胞的影响？

近年来，细胞内活性氧（ROS）广受人们关注，因为ROS被认为是一些公共卫生相关疾病的原因之一，如哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病，骨质疏松症， 一些神经退行性疾病和唐氏综合症。市场上许多探针因为靶向线粒体并区分个体中的ROS技术不成熟而铩羽而归，那么如何精确的检测ROS对细胞的影响？

百萤生物为您推荐AAT Bioquest 研发的新的线粒体ROS荧光探针家族，它不仅可以特异性地定位在线粒体中，而且可以选择性地检测不同的ROS物种，包括多个Ex / Em波长的超氧化物，羟基自由基和过氧化氢。这些探针是线粒体靶向的ROS探针，可用于通过荧光成像和流式细胞仪实时监测活细胞中ROS水平的外源和内源变化。

以下是AAT的ROS荧光探针在经典细胞中的荧光反应

图1. HeLa细胞中线粒体过氧化氢（H₂O₂）的荧光图像（A），Jurkat细胞的流式细胞仪分析（B）用OxiVision Blue染色30分钟，用或不用100μMH₂O₂在37℃下处理90分钟。 使用DAPI-荧光显微镜获取荧光图像。 使用Pacific Blue通道中的ACEA NovoCyte流式细胞仪获得流式细胞术分析。（相关产品货号：21505）

图2. HeLa细胞中线粒体羟基自由基（?OH）的荧光图像。 用或不用芬顿反应（10μMCuCl2和100μMH2O2）在37℃下处理用MitoROS OH580染色的细胞1小时以诱导外源羟基自由基。 红色：MitoROS OH580货号：16052; 蓝色：Hoechst 33342货号：17530。

图3. RAW 264.7巨噬细胞中线粒体羟基自由基（?OH）的荧光图像。用MTOROS OH580染色的细胞用生长培养基中0-100 ng / mL的PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯）处理 在37oC下保持4小时内源性羟基自由基。 红色：MitoROS OH580货号：16052; 绿色：核绿LCS1货号：17540。

图4.用（A）MitoROS 520或（B）MitoROS 580染色的RAW 264.7巨噬细胞中线粒体超氧化物（O₂? - ）的荧光图像，使用或不使用50μMAMA（抗霉素A）在37℃下处理30分钟。 （C）在96孔黑色壁/透明底板中接种过夜的HeLa细胞，用MitoROS 580染色，并与50μMPyo（绿脓菌素），50μMAMA或不经处理（对照）在37℃温育30分钟。 使用CLARIOstar酶标仪（BMG Labtech）在底部读取模式下在Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）监测荧光信号。 （D）用或不用50μMAMA在37℃下处理1小时的MitoROS 580标记的Jurkat细胞的流式细胞术分析。 使用流式细胞仪（BD FACSCalibur）在FL2通道监测荧光信号。

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