RPA被誉为DNA诊断领域的革命性创新

　英国TwistDx公司(前身为ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增专利技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新。

　　What is RPA?

　　概念：重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，最佳反应温度在37°C左右。

　　RPA技术原理：

　　重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

　　Who uses RPA?

　　以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。

　　产品名称货号规格储存检测方法

　　TwistAmp BasicTABAS03KIT96次-20℃终点检测：如凝胶电泳

　　产品名称货号规格储存检测方法

　　TwistAmp exoTAEXO02KIT96次-20℃实时荧光定量检测

　　产品名称货号规格储存检测方法

　　TwistAmp nfoTANFO02KIT96次-20℃测流层析试纸检测

　　RPA技术有哪些特性:

　　RPA的特性：快速检测 15min进行单分子检测试验， 简易包装 稳定冻干形式试剂. 无需热循环过程 摆脱任何仪器束缚. 便携 设备要求低，贫瘠条件亦能 完成检测

　　RPA能实现多重化吗

　　可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过，多重化的引物组合需要精心设计，以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是，RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物，就应该控制不同引物的量。另外，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

　　能否对模板进行定量

　　可以。扩增子达到可检出水平的时间，依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多，扩增子就越快达到可检出水平。不过，这种定量需要精心的实验安排，确保对照反应是同时开始的。举例来说，可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一旦进入体系，RPA反应就会开始。

　　此外，较慢的扩增过程有助于更精确的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

　　能否进行荧光终点分析

　　可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。

　　能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸

　　支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

　　跑胶前需要回收RPA产物吗

　　需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。

　　恒温扩增技术

　　取代PCR的核酸扩增术 ，

　　领域：广泛应用于临床诊断，食品安全检测，动物疾病检测等领域

　　特点：快速，高效，特异，无需专门设备

　　LAMPRPA

　　开发公司日本荣研生物英国TwistDx——

　　酶组分链置换DNA聚合酶重组酶;单链结合蛋白;链置换DNA聚合酶——

　　最适反应温度60-65℃37-40℃Win!

　　反应时间40min左右15min左右Win!

　　引物数2对1对Win!

　　状态液体冻干Win!

　　检测方式目视;比浊检测电泳;测流试纸;探针法荧光定量——

　　可否用于下游应用否否——

　　仪器水浴锅或恒温箱无需任何仪器Win!

　　国产化，价格低价格相对较高——

　　硬性缺点气溶胶，假阳性终端检测相对复杂，价格高——

　　新一代RPA恒温扩增荧光检测仪T8特点：小巧的的，强效的，精准的

　　红隼具有紫外的视觉，它们在25m的高空可以看在猎物的尿迹。

　　T8 等温仪介绍：

　　1、小巧便携

　　2、强效的FAM?和ROX?通道作为标准

　　3、精确且实时的屏幕输出

　　4、自动磁力混匀

　　5、无需电脑

　　详情请见：http://www.twistdx.com.cn/products/yqhc/64.html

　　可选配件(需另购)：外部电源(http://www.twistdx.com.cn/products/yqhc/65.html)，手提箱(http://www.twistdx.com.cn/products/yqhc/66.html)

　　RPA核酸检测系列之RPA最新应用

　　更多RPA相关应用请见：

　　http://www.twistdx.com.cn/

　　产品详情：