皮质醇ELISA检测试剂盒（唾液）酶免法定量检测，带参考文献

皮质醇ELISA检测试剂盒（唾液）酶免法定量检测，带参考文献

Catalogue Number：    CAN-C-290
Kit Size：       96 Wells
Kit Type ：       Competitive ELISA
Sensitivity：     1 ng/mL
Sample Type/Sample Volume：   Human saliva / 50 μL
Calibrator Range：     1-100 ng/mL
Total Incubation Time：     60 minutes

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REFERENCES（参考文献）
1. Brock P.,et al., Clinical Chemistry 24/9:1595, 1978.
2. Morris R., Annals of Clinical Biochemistry 15:178, 1978.
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4. Vecsei P., et al., Experimentia 28:1104, 1972.
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10.Papanicolaou,D.A. et al J. Cli Endocrinol Metab 87(10)
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11.Check, J.H., et al, Falsely elevated steroidal assay levels
related to heterophile antibodies against various animal
species. Gynecol Obstet Invest 40:139-140, 1995.

产品编号：CAN-C-290
用途：
用酶免法定量测定人体唾液皮质醇含量，只能体外专用。
测试原理
酶免测定法原理遵循典型的竞争抑制机制。存在于标准样本，对照样本和受
测样本中的未标记的抗原与酶标抗原结合物之间相互竞争，争夺与事先包被在微
孔板上的数量有限的抗体发生免疫反应的机会，然后通过洗涤和澄清去掉未被结
合的物质。洗涤后再加入酶底物，最后加入终止液终止酶促反应。吸光度可以通
过酶标仪读取。形成的颜色的强度将与被检测的样本中的皮质醇的浓度成反比。
应用一套标准绘制标准曲线，从曲线上直接读取到受测样本和对照样本中皮质醇
的含量。
操作中的注意事项
1. 在使用本试剂盒之前，使用者要对本说明书有很深刻的了解，严格认真按
照操作指南进行操作；
2. 为了评估结果的可靠性，对照样品含量应包含从高到低的各种水平；
3. 当要用到水稀释或重构时，请使用蒸馏水或者去离子水；
4. 为减少与潜在的有害物质接触，在处理试剂盒及人的样本的时候请戴上手
套；
5. 所有试剂在使用前拿到室温下温和摇匀，避免反复冻融试剂和样本；
6. 在每次运行前确定校准曲线；
7. 每次检测时都应该包含校准液，并确保其检测值落在可信任区间内；
8. 不规范的程序操作，不精确的吸取，不充分的洗涤以及不正确的储存都有
可能导致测试值不在确定的范围内；
9. 读取微孔板时，微孔板中如果出现气泡将会影响吸光密度（OD 值），所
以在读数前请小心移去微孔板中的气泡；
10. 底物溶液TMB 有很强的光敏感性，应保持避光保存。如果发现溶液
现蓝色，可能是由于不稳定或者已经被污染，溶液将不能再使用；
11. 在调制底物溶液和终止液时，不要使液体接触到吸管的金属；
12. 为了避免污染，请使用一次性吸嘴吸取各种试剂和样品，对照样品等；
13. 切勿将不同批次的试剂组合使用，不使用任何过期产品；
14. 试剂盒必须当成是危险废弃物并遵照国家有关制度进行销毁。
限制性说明
1. 试剂盒中的所有试剂是为测定人体唾液中的皮质醇含量校准的，并不能测
定人体血清，血浆中的皮质醇含量，也不能用于其他物种。
2. 任何含有样本或对照血清含有叠氮或硫柳汞都不适合本试剂盒套组，因为
这样可能导致错误的结果。
3. 只有校准器A 适合稀释任意高含量唾液样本，使用其他任何试剂可能导致
错误的结果。
4. 试剂盒的结果不能作为临床诊断的唯一依据。
安全注意事项
潜在的生物危险品
在准备准备样品和对照样品时所使用的人血清，经测试过没有发现乙型肝炎
表面活性抗原，也没有发现丙型肝炎抗体的，而且艾滋病毒测试呈阴性。但无论
如何，没有任何测试方法可以保证绝对不含任何乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒，
艾滋病毒或者其他病毒，所以这些试剂应被当做潜在的生物危险品处理，并和其
他的血样样品一样处理。
化学危险品
避免接触含有TMB、过氧化氢和硫酸的试剂，如果接触到这些物质，请尽
快用大量的清水冲洗。TMB 疑是一种致癌物质。
样本的采集与储存
每个重复测定的样本大约需要1ml 的唾液。用一个干净的玻璃管采集4-5ml
唾液，可以一口一口吐，但不要在食物，饮料或者刷牙诱致或强制下采集。采集
前先简单漱漱口，不要使用已经被血液污染的样本。如果不是立即使用的话，采
集好的样本可以保持在4℃左右保持24 小时，或者保持在-10℃或更低的温度。
考虑到任何人的样本都可能是潜在的生物危险品，处理的时候应事先采取一定的
预防措施。
样品预处理
样品管要放在冰箱里冰存。当准备使用时，取出样本解冻、离心，收集上清
到一个干净的事先贴好标签的试管。
没有提供，但需要用到的试剂和仪器
1. 可以精确吸取50, 100, 150 和 300 μl 的吸管
2. 一次性吸嘴
3. 蒸馏水或去离子水
4. 板振动筛
5. 台式离心机
6. 带450nm 滤光片的酶标仪，上线的OD 值是3 或者更大（参阅检测流程
第10 步）
提供的试剂如下
1、包被好兔抗皮质醇抗体的微孔板，孔与孔相互独立分开——随时可用
包含：一个96 孔（12×8）包被好兔抗皮质醇抗体的微孔板，放在一个带干
燥剂的可重复密封的袋里
保存：2-8℃冷藏
稳定期：12 个月或见标签所示
2、皮质醇，辣根过氧化物酶（ HRP ）结合物浓缩液——需要调制
包含：皮质醇，辣根过氧化物酶结合物，溶解在含无汞保护剂的蛋白基质缓
冲液中。
规格：300 μl/vial
保存：2-8℃冷藏
稳定性：12 个月或见标签所示
准备工作：使用前以1：50 的比例稀释到检测缓冲液里，即将40μl 的hrp
稀释到2ml 的检测缓冲液中，如果是整板使用，将240μl 的hrp 稀释在12ml
的检测缓冲液里，并丢掉管内剩余的试剂。
3、皮质醇校准液——随时可用
包含：6 管含皮质醇的带无汞保护剂的蛋白基质缓冲液。准备好的已知含量
的皮质醇标准添加液。
下表列出了近似浓度，具体的浓度请参阅标签所示：

保存：2-8℃冷藏
稳定性：未开封条件下可保存12 个月或见标签所示，一旦开封，请于14
天内使用或者分装后冰存，避免多次反复冻融。
4、对照样品——随时可用
1 管含有皮质醇的带无汞保护剂的蛋白基质缓冲液. 准备好的已知含量的皮
质醇标准添加液。参考小瓶标签预期值和可接受的范围。
规格：0.6ml/vial
保存：2-8℃冷藏
保存期：未开封条件下可保持12 个月或见标签所示，一旦开封，请于14 天
内使用或者分装后冰存，避免多次反复冻融。
5、浓缩洗涤液——需要调制
包含：一瓶含无汞保护剂的去离子清洗液
规格：50ml/瓶
保存：2-8℃冷藏
稳定性：12 个月或见标签所示
调制：1:10 稀释到去离子水或蒸馏水里面。如果整板使用，将50ml 浓缩洗
涤液稀释到450ml 的水中。
6、检测缓冲液——随时可用
一瓶含无汞保护剂的蛋白基质缓冲液
规格：15ml/vial
保存：2-8℃冷藏
稳定性：12 个月或见标签所示
7、TMB 底物——随时可用
包含：一瓶包含四甲基联苯胺和过氧化氢但不含DMF 和DMSO 的缓冲液
规格：16ml/瓶
保存：2-8 冷藏
稳定性：12 个月或见标签所示
8、终止液——随时可用
内容：一管1M 的硫酸
规格：6ml/ vial
保存：2-8℃冷藏
稳定性：12 个月或见标签所示
检测流程
样本预处理：解冻和离心
使用前将所有试剂恢复到室温状态，准备校准液、参照样本和待测样本，一
式几份。一旦开始，直到测试完中间不能中断。
1. 配制工作液——配制HRP 结合物溶液和洗涤液。
2. 取出所需数量的微孔条。将不用的微孔条重新封装好放回冰箱。
3. 将各种校准液，参照样品和受测样品各吸取50μl 到相应的已做好标记
的孔里面。
4. 吸取100μl 的结合物工作液到添加到每个孔（推荐使用多通道吸管）。
5. 室温下在板振动筛（大约200 转/分钟）下孵育45 分钟。
6. 用300μl 稀释的洗涤液冲洗所有的孔三次，用吸水纸吸干板上所有水
分，并确保其被吸干。建议使用清洗器。
7. 吸取150μl 的TMB 底物溶液滴入到所有的孔中，并在中间间隔一段固
定时间。
8. 室温下在板振动筛孵育10-15 分钟或者直到校准液A 呈现深蓝色，得
到理想OD 值。
9. 吸取50μl 的终止液滴到所有孔，间隔时间与第7 步相同。
10. 加入终止液20 分钟后，用微孔板读数器读取在450nm 滤光片下板孔
的OD 值。
*如果读数超过检测的上限OD 值，或者没有450nm 滤光片可用，可用405nm
或415nm 滤光片代替。这样OD 值将会降低。但不管怎样都不会影响受测样本
和对照样本的结果。
计算
1. 计算每种校准液所有重复检测样本的平均OD 值
2. 以OD 值为Y 轴，校准液的浓度为X 轴在半对数坐标纸上绘制校准曲
线。如果有免疫测试软件，推荐使用4 参数曲线。
3. 计算待测样本所有重复检查样本的平均OD 值
4. 在校准曲线上直接读出待测样本的OD 值
5. 如果样品的读数超过100ng/ml,将其与校准液A 以不超过1：8 的比例
稀释，所得结果乘以稀释倍数。
典型的统计表格

典型的校准曲线
本曲线只做参考，不能直接使用本曲线计算结果。

性能特点
敏感度
检测下线是从标准曲线以既知浓度的校验液A 的10 次分析平均OD 值减去
2 倍标准差计算而得。因此，本公司的唾液皮质醇试剂盒的敏感度是1ng/ml。
特异性（交叉反应）
下列化合物被分别测试做交叉反应。以唾液皮质醇试剂盒与皮质醇交叉反应
的值为100 ％作标值。

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