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缓冲液、培养基及各类常用溶液的配制方法合集 - MedChemExpress

上海皓元生物医药科技有限公司2024年1月22日 10:06 点击：367
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实验室中常常使用的各类溶液种类繁多，且配制方法五花八门，是否挑花眼了呢？今天小 M 替大家总结了近三十种常用溶液、缓冲液、培养基的配制方法，涵盖了分子生物学、蛋白分析、细胞培养、微生物培养等各个领域。

▐ 一、质粒提取之 Solution I、II、III 

抽提质粒 DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒 DNA 的方法，Solution I 的目的是螯合二价金属离子达到抑制 DNase 活性的作用，Solution II 目的是溶解细胞从而释放 DNA，Solution III 则是为了沉淀蛋白及中和反应。



▐ 二、核酸电泳之 TBE、TAE 和 MOPS 缓冲液 

TBE、TAE 和 MOP‍S 作为实验室储备溶液中最常见的几种缓冲液，其缓冲能力与应用场景却有一些区别。TAE 的缓冲能力弱于 TBE，并且 TBE 跑胶分辨率高于 TAE。在应用时，TBE 常用于小分子 DNA 片段电泳分析，TAE 适用于大分子 DNA 片段电泳分析及后续酶促实验，MOPS 则适用于更多 RNA 电泳分析。



▐ 三、蛋白电泳缓冲液

蛋白电泳缓冲液种类非常之多，需要根据凝胶体系来进行选择。凝胶系统为 Tris-甘氨酸体系时，可选择 Tris-甘氨酸电泳缓冲液，凝胶系统为 Bis-Tris 体系时，可选择 MES 或 MOPS 缓冲液，当凝胶系统为 Tris-tricine 体系时，则选择 Tricine 缓冲液。

并且，蛋白电泳缓冲液分为变性与非变性缓冲液，区别在于变性缓冲液需加入 SDS 中和电荷。我们通常研究 WB、IP 时，使用变性缓冲液研究分子量大小即可，非变性缓冲液常用于研究蛋白空间结构、等电点等。



▐ 四、上样缓冲液

上样缓冲液（Loading Buffer）是各类实验不可缺少的，可根据实验类型选择不同的 Buffer，以下展示 DNA 电泳 Loading Buffer、RNA 电泳 Loading Buffer 以及 SDS-PAGE Loading Buffer 的配制方法。


▐ 五、分子杂交常用溶液

分子杂交包含了核酸杂交和蛋白杂交，在实验过程中，各类常用溶液也是必不可少的一环。使用膜杂交法时，可选择 Denhardt's 溶液，核酸杂交中变性和清洗，可选择 SSC 溶液、 DNA 变性缓冲液。


▐ 六、蛋白清洗、转膜常用溶液

蛋白分析的过程，少不了转膜液、清洗液的参与。WB 转膜液用于将印迹从凝胶转印至膜上，TBST 缓冲液可以用于 WB、IF、IHC 等实验中封闭液、一抗或二抗配制以及抗体孵育后的洗涤，WB 封闭液则可用于减少非特异性抗体结合。


▐ 七、细胞培养常用平衡盐溶液

平衡盐溶液是细胞培养过程中的常见溶液。在选择平衡盐溶液时，PBS 主要用于胚胎、组织、细胞的漂洗、冻存和培养，而 HBSS 除了 PBS 的用途外，还可以用于细胞培养试剂的配制、细胞计数的稀释，EBSS 缓冲能力最强，是专为 CO2 环境中的细胞短期维持而设计。


▐ 八、微生物培养常用溶液

在微生物培养中，LB 培养基当属最常见的，另外还有 Ampicillin 可用于筛选抗性菌，IPTG 一般用于蓝白斑筛选，而 X-Gal 作为 β-半乳糖苷酶的显色底物，常用于 β-半乳糖苷酶原位染色检测及蓝白斑筛选。


缓冲液的进阶知识点


缓冲溶液 (Buffer Solution) 通常指的是由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液，作为分析化学当中的重要概念，缓冲液的 pH 值在一定的范围内可以保持稳定，不因稀释或加入少量酸碱而发生 pH 的改变，可以广泛应用于各类实验中。


▐ 缓冲溶液的选择
需要根据实验所需维持的 pH 范围来选择合适的缓冲液。缓冲液作为弱酸、弱碱及其盐的混合液，要使其具备足够的缓冲能力，最重要的是使缓冲液中弱酸的 pKa 等于或接近于实验所要求的 pH 值，缓冲液中弱酸的 pKa 是选择缓冲溶液的主要依据。

表 1. 常见缓冲液的缓冲范围及 pKa。


▐ 缓冲液配制的常见问题

在缓冲液的配制过程中，容易出现以下几个常见的问题，小 M 特地来给大家盘点一下，希望帮助大家不要出错~


本期小 M 为大家总结了实验室常见缓冲液的配制方法，为大家节约在实验中反复查资料的时间，快来收藏文章吧~

MES

广泛应用于植物培养基、试剂溶液和生理实验中调节 pH 值。

Tris

三(羟甲基)氨基甲烷，一种低毒性的生物惰性氨基醇。

Bis-Tris

适用于血红蛋白分离。

HEPES

通常添加在细胞培养基中维持细胞稳态。

MOPS

常作电泳缓冲液组分。

Tricine

作为缓冲剂广泛应用于蛋白质电泳、核酸分析和免疫学等方面，可以帮助调节 pH 值并稳定化学反应。

EDTA

一种金属螯合剂，可减少金属离子催化的蛋白质氧化损伤，并维持蛋白质纯化过程中的还原环境，常用作蛋白质的纯化和储存。

ADA

是一种生物缓冲液。

PIPES

是 PIPES 缓冲液的重要组成部分。

BES

是一种标准生化缓冲液。

Boric acid

是一种防腐剂，用于配制生物缓冲液。

Glycine

一种氨基酸，用于配制生物缓冲液。

Tryptone

胰蛋白酶胨，是生物培养基的常见成分。

Yeast extract

酵母可溶性部分的浓缩物。

IPTG

可用于蓝白斑筛选。

X-GAL

广泛使用的发色 β-半乳糖苷酶底物。



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（来源： 上海皓元生物医药科技有限公司 ）


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