复方地西泮片中3种成分含量测定的改良研究

复方地西泮片(原名谷维安片)含谷维素、维生素B1与地西泮，为国家三类新药。主要用于治疗各类神经官能症、植物神经失调等症。我们拟出了快速、简便、准确的测定复方地西泮中3种成分含量的方法，结果令人满意，报告如下。

材料与方法

1　仪器与试药
　　岛津UV2201、UV3000紫外分光光度计；SP-8800高效液相色谱仪，Spectra 200型UV检测器，4400积分仪；甲醇为优级纯，其他试剂均为分析纯。地西泮对照品（中国药品生物制品检定所）、谷维素、维生素B1、安替比林均为已知含量的原料药。样品为济宁安康制药厂委托送验样品。
2　方法
2.1　地西泮的含量与含量均匀度测定　曾采用系数倍率法进行测定，由于地西泮在样品中含量少(1.25mg)，比例小(分别为谷维素的1/40与维生素B1的1/10),测定误差较大,含量限度仅定为标示量的85.0%～115.0%; 我们试用HPLC法,以安替比林为内标,使地西泮分离于其他物质后进行定量,精度高,结果准确,含量测定限度提高为标示量的90.0%～110.0%。
　　色谱柱：C18，5μm，25cm×0.46cm；流动相：甲醇-水(75∶25)，用前用0.45μm滤膜滤过，抽滤并电磁搅拌以除气；流速：0.85ml/min；检测波长230nm；衰减64；进样量5μl。
　　线性关系的考察：精密称取地西泮对照品约12.5mg, 置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照溶液；另取安替比林约0.2g,精密称定，置200ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，作为内标溶液。
　　精密量取对照溶液2，4，6，8，10ml，分别置25ml量瓶中，各精密加入内标溶液3ml,用流动相稀释至刻度，混匀。取各浓度分别4次注入液相色谱仪，以对照品与内标的峰面积比为纵坐标，以对照品浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程:Y=0.02943＋0.02289X,r=0.9999, 地西泮在0.1～0.5μg范围内线性关系良好。
　　含量均匀度测定：取本品1片，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液3ml与流动相适量，超声处理后用流动相稀释至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液5μl注入液相色谱仪，照以上方法进行色谱分析．



　　含量测定：取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于地西泮1.25mg)，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液3ml与流动相适量，超声处理，以下照含量均匀度方法测定并计算。
　　回收率试验：取上述已知含量的复方地西泮片粉（批号940318）为基底，加入地西泮对照品适量，照含量测定方法测定加样回收率。
2.2　谷维素的含量测定　曾以正庚烷为溶剂提取后用紫外分光光度法测定含量。正庚烷溶剂膨胀系数大，结果稳定性较差，而且价格较贵。
　　我们参照资料［1］ ，试用价廉的0.5%硫酸乙醇溶液为溶剂，在200～400nm的波长范围内扫描，在其最大吸收波长处(327nm),维生素B1无吸收，地西泮虽有吸收，但由于量少悬殊，并不影响测定，见图2，故选此波长作为测定波长。




　　用0.5%硫酸乙醇溶液制成含谷维素10～20μg/ml系列浓度的标准溶液，在327nm波长处测定其吸收度，得回归方程：A=0.0287+0.0357C,r=0.9999,线性关系良好。
　　含量测定：精密称取地西泮项下的细粉适量(约相当于谷维素35mg) ，置100ml量瓶中，加0.5%硫酸乙醇溶液适量，超声处理后，用0.5%硫酸乙醇溶液稀释至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml。置50ml量瓶中，用0.5%硫酸乙醇溶液稀释至刻度，混匀，在327nm波长处测定吸收度。
　　回收率试验：取上述已知含量的复方地西泮片粉（批号940318）为基底，加入谷维素适量，照含量测定方法测定加样回收率。
2.3　维生素B1的含量测定　曾采用硅钨酸沉淀法进行测定，专属性高，结果可靠准确，但操作费时、繁杂。如套用中国药典维生素B1片的测定方法［2］ ，地西泮在盐酸溶液(1→1 000) 中溶解，干扰测定。我们利用它们在水中溶解度的差异(维生素B1易溶，地西泮几乎不溶，谷维素不溶［2～4］），先以水提取维生素B1后，再以盐酸溶液稀释，照药典方法进行测定，排除了干扰，结果准确，操作方便。



　　含量测定：精密称取地西泮含量测定项下的细粉适量(约相当于维生素B1 50mg)，置100ml量瓶中，加水适量，振摇使维生素B1溶解，用水稀释至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，混匀，在246nm的波长处测定吸收度。
　　回收率试验：取上述已知含量的复方地西泮片粉（批号940318）为基底，加入维生素B1适量，照含量测定方法测定加样回收率。

结　　果

1　地西泮的含量、含量均匀度及回收率试验
　　见表1，表2，表3。

表1　地西泮的含量均匀度测定结果


批号 含量均匀度范围(标示量，％) (标示量％) A+1.8S
940318 97.4～102.3 99.9 3.1
940319 99.7～102.4 101.7 3.4
940320 99.0～106.8 102.6 7.0

表2　地西泮的含量测定结果


批　号 标示量(%) RSD(%，n=4)
940318 100.8 0.58
940319 102.0 0.78
940320 102.5 0.34

表3　地西泮加样回收率的实验结果


　 样品含量（mg） 加样品（mg） 测得量（mg） 回收率（%）
1 0.6295 0.5500 1.197 101.5
2 0.6235 0.5500 1.173 99.96
3 0.6248 0.5500 1.174 99.93
4 0.6452 0.5500 1.205 100.8
5 0.6388 0.5500 1.197 100.7
均值 0.6324 0.5500 1.189 100.6

2　谷维素的含量测定及回收率试验
　　见表4及表5。
表4　谷维素的含量测定结果(标示量％)


批　号 本 法 RSD(%，n=5) 原 法 RSD(%，n=5)
940318 96.4 0.50 99.0 1.30
940319 97.6 0.72 101.2 1.51
940320 95.2 0.44 94.7 1.57

表5　谷维素加样回收率的实验结果


样品号 样品含量（mg） 加样品（mg） 测得量（mg） 回收率（%）
1 20.74 15.00 35.46 99.22
2 22.02 15.00 36.62 98.92
3 20.08 15.00 34.68 98.86
4 20.54 15.00 36.00 101.30
5 20.22 15.00 35.33 100.30
均值 20.72 15.00 35.62 99.70

3　维生素B1的含量测定及回收率试验
　　见表6及表7。
表6　维生素B1的含量测定结果(标示量％)


批　号 本 法 RSD(％，n=5) 原 法
940318 101.0 0.91 98.4
940319 102.1 0.71 99.2
940320 101.3 0.97 100.4

表7　维生素B1加样回收率的实验结果


样品号 样品含量（mg） 加样品（mg） 测得量（mg） 回收率（%）
1 30.25 20.00 50.30 100.1
2 30.42 20.00 50.37 99.9
3 30.08 20.00 51.38 102.6
4 29.88 20.00 50.68 101.6
5 29.00 20.00 48.71 99.4
均值 29.93 20.00 50.29 100.7

讨　　论
　　本品中地西泮的HPLC测定曾有报道［5］，测定波长为292nm，流动相为乙腈-甲醇-水(35∶103∶48，用乙腈为“降低压力”),峰高比定量。本实验改用75%甲醇作流动相，降低费用，工作压力并不高(仅约1 300 psi)，测定波长改用地西泮的最大吸收波长230nm,提高测定灵敏度，并未发现“影响测定的负峰”，以峰面积比定量。
　　谷维素为以环木菠萝醇类为主体的阿魏酸酯的混合物［4］，不溶于水，在甲醇中微溶，理化性质与维生素B1相差甚远，所以不可能如报道［5］ 所述在色谱图前部紧挨维生素B1出峰，而可能为所加内标己烯雌酚的分解产物。我们曾以甲醇为流动相，流速为1ml/min进行实验，结果谷维素在18～30 min出一复峰，与预测相吻合。因此，为减少谷维素进入色谱柱，难以洗出，以流动相(75%甲醇) 溶解样品，可降低试液中谷维素的浓度。这样，谷维素在实验条件下出峰时间约在4h后，仅使基线稍呈波动，不影响测定。待实验结束后，用甲醇充分冲洗色谱柱即可。
　　内标物质改用安替比林，保留时间比样品短3min，可保证日后充分分离。
　　谷维素改用硫酸乙醇溶液，结果准确，费用降低，方便实用。但所得回归方程与报道［1］相差甚远，所测吸收系数（E1%1cm）与其报道基本一致。经计算，认为该报道回归方程有误［6］。而且应避光操作，否则含量很快下降。维生素B1改用提取UV法，方便、迅速、准确，但加水放置3h后，再滤过测定时，发现含量会高出3%～5%，可能由于在水中难溶的地西泮或谷维素有缓慢溶出的现象，只要及时测定或及时滤除不溶物，即可避免上述情况。